Tesis defendidas

En esta tesis se aborda el diseño y caracterización de una vacuna basada en nanoparticulas de óxido de hierro para su aplicación en inmunoterapia del cáncer. Concretamente, las nanoparticulas están biofuncionalizadas con una combinación de agonistas sintéticos de TLR (Poly(I:C) e imiquimod), que activan de manera sinérgica una respuesta inmune innata. Las células dendríticas, que son las principales células presentadoras de antígeno, reconocen dichos ligandos como señales de peligro y en consecuencia se produce su activación y maduración. Estas células a su vez son capaces de generar y coordinar una respuesta inmune adaptativa específica de antígeno. Esta capacidad inmunoestimuladora de las nanoparticulas, junto con su particular biodistribución, permite crear una potente respuesta de forma dirigida contra el tumor. La inmunización de ratones que portan el modelo tumoral de melanoma B16F10 demuestra que esta `nanovacuna¿ es capaz de retrasar o incluso impedir el crecimiento tumoral, además de prolongar la supervivencia de los animales.

La artrosis es una enfermedad con una prevalencia alta que va en aumento, con un alto coste sanitario en nuestro medio, asocia morbimortalidad y es moderadamente incapacitante para quien la padece. En contraposición, es una enfermedad con una patogenia poco conocida y sin un tratamiento que altere su progresión. Para esto es necesario conocer los actores y los mecanismos implicados en la fisiología y en la patogenia de la artrosis. Pero ésta y la articulación como elemento central de la artrosis, son objeto de relativamente pocos estudios si lo comparamos con otros órganos o patologías del organismo, como el cerebro o el corazón. En el presente trabajo, prospectivo observacional, analizamos 11 aminopeptidasas en líquido sinovial de pacientes con artrosis de rodilla antes y durante el tratamiento con Plasma Rico en Factores de Crecimiento. Identificamos actividad de todas ellas, algunas de las cuales describimos también actividad en fracción soluble y en fracción unida a membrana, siendo la mayor descripción realizada hasta la fecha. Se trata de un estudio novedoso ya que, a pesar de la importancia que está adquiriendo la proteomica, en su mayoría apenas si han sido descritas. Con ello planteamos que el sistema renina-angiotensina, el opioide-encefalinergico y el oxiocinergico están implicados en la fisiopatología articular. Tras la revisión bibliográfica realizada de todos los estudios previos encontrados de estas aminopeptidasas a nivel articular y de las funciones descritas en otros tejidos, proponemos que el papel de estas aminopeptidasas en la artrosis, incluirían al menos, la regulación de las vías-inmunoinflamatorias, el estrés oxidativo, las vías de la osificación endocondral, la senescencia articular y el dolor. Las diferencias obtenidas en la actividad de algunas aminopeptidasas por grado de artrosis, muestran un aumento significativo de la actividad en el grupo de pacientes con mayor artrosis, excepto para la Dipeptidil Peptidasa IV, que muestra una relación inversa. Por todo ello, algunas de estas peptidasas tienen potencial e interés para ser marcadores diagnósticos, pronósticos, predictivos o dianas terapéuticas en un próximo futuro.

Tesi honek barne hartzen dituen bi proiektuak ausazko entsegu klinikoak izan dira. Helburu nagusia hirugarren adineko pertsona zaurgarrietan (batetik hirugarren adineko egoitzetako pertsonetan eta bestetik minbizia zuten hirugarren adineko pertsonetan) ariketa/jarduera fisikoak duen eragina aztertzea izan da: 1) Hirugarren adineko egoitzetako pertsonen ohiko jarduera fisikoa eta egoera fisikoa, hitzezko memoria, bizi-kalitatea eta depresioarekin lotuta daudela behatu dugu. Miostatina kontzentrazio altuagoak behatu ditugu egoera fisiko hobea duten hirugarren adineko pertsonetan. Bestetik, norbanakoari egokitutako eta intentsitate moderatuan buruturiko ariketa fisikoko programa gainbegiratuak eraginkorra dirudi hirugarren adineko egoitzetako pertsonen egoera fisikoa, funtzio kognitiboa eta afektibitate-egoera hobetu edo mantentzeko, eta hauskortasuna eta ondorio kaltegarriak murrizteko. 2) Telefonoz helarazi diren eta norbanakoan oinarrituriko jarduera fisikoko gomendioek ez dute gaitasun funtzionalaren galera murriztu urte batera, baina ezberdintasun adierazgarriak lortu dira talde esperimentalaren alde emakumeetan eta bularreko minbizia zuten azpi-taldeetan bi urteren ondoren. Beraz, emaitza hauek minbizia duten hirugarren adineko pertsonetan norbanakoan oinarritu diren eta telefonoz helarazi diren jarduera fisikoko gomendioek duten garrantzia azpimarratzen dute.

La infertilidad es un importante problema médico cuyo estudio es de gran interés científico y social. La infertilidad masculina está causada por uno o varios fallos durante la biogénesis del espermatozoide. El modelo murino infértil globozoospérmico Gopc-/- se caracteriza por presentar espermatozoides con cabezas de globulares y flagelos espirales, debido a la deslocalización del complejo acrosoma-acroplaxoma-manchette, la incorrecta biogénesis del acrosoma, y la forma redonda de los núcleos. En este trabajo se ha analizado la distribución y expresión, en la espermatogénesis de ratones Gopc-/-, de dos proteínas espermáticas: GCNF, un factor de transcripción; y sp56, una proteína acrosómica de reconocimiento de la zona pelúcida del oocito en la fecundación. Se ha observado que hay mayor transporte intracelular de las dos proteínas y que están en alta concentración en las células germinales de ratones Gopc-/-. Estos resultados confirman que la ausencia de la proteína GOPC provoca una desorganización del complejo acrosoma-acroplaxoma-manchette, lo que induce un desajuste en el transporte de las proteínas espermáticas hacia su lugar de actuación. También se ha bloqueado in vivo la acción de la proteína GOPC directamente en las células germinales para conseguir un fenotipo globozoospérmico. Este bloqueo de la proteína GOPC mediante microinyección intratesticular ha provocado una espermiogénesis defectuosa en muchas de las células germinales, similar a lo observado en las células haploides de ratones Gopc-/-. El bloqueo de una proteína diana exclusivamente en las células germinales podría ser la base para desarrollar un método anticonceptivo para el hombre duradero, no hormonal y reversible.

Los ciclos de hiperstimulación ovárica controlada son ampliamente utilizados en las técnicas de reproducción asistida debido al mayor número de óvulos que se obtienen por ciclo y al consecuente aumento de las probabilidades de éxito de los tratamientos. Sin embargo, la manipulación hormonal que conllevan estos ciclos puede producir efectos adversos tanto a nivel ovárico como gestacional, entre ellos alteraciones redox. En esta tesis doctoral se ha estudiado el sistema antioxidante del líquido folicular (microambiente del ovocito) de una misma mujer después de un ciclo de ovulación natural y después de un ciclo de hiperestimulación ovárica controlada. Para ello se han utilizado técnicas espectrofotométricas, espectrometría de masas, inmunotransferencia western, técnicas de cultivos celulares y microscopia confocal. Los resultados mostraron que los ciclos de hiperestimulación ovárica provocan una disminución de la protección antioxidante del líquido folicular y por tanto del ovocito, frente a los ciclos naturales en los que el ovocito se encuentra más protegido. Esto se vio reflejado, entre otras cosas, en una disminución de la actividad de los enzimas PON, los cuales hemos caracterizado por primera en las células de la granulosa humanas, lo que nos lleva a sugerir un posible papel en los procesos reproductivos.

En la tesis titulada Plasma Rich in Growth Factors to treat knee osteoarthritis se exponen 4 trabajos experimentales basados en el uso del Plasma rico en factores de crecimiento. Los objetivos específicos de los trabajos realizados son los siguientes: 1. Validar las inyecciones intraarticulares de PRP como un tratamiento seguro y eficaz para la artrosis de rodilla. 2. Evaluar una nueva vía para tratar la artrosis de rodilla, utilizando como diana la membrana sinovial, la superficie del cartílago articular, el líquido sinovial y el hueso subcondral, y combinando infiltraciones intraarticulares e intraóseas de Plasma rico en factores de crecimiento (PRP). 3. Explorar la adecuación del Líquido sinovial como fuente de células madre mesenquimales (CMMs) y sus respuestas a los mecanismos bilógicos implicados en los efectos de dos modalidades distintas de tratamiento de PRP en pacientes con artrosis: Inyecciones intraarticulares con la membrana sinovial, la superfcicie del cartílago articular y el líquido sinovial como diana, o la combinación de inyecciones intraarticulares e intraóseas, alcanzando por último el hueso subcondral.

El objetivo principal de esta tesis era investigar la posible relación entre la pigmentación de la piel y el sistema inmunitario en humanos. Para ello, hemos analizado por un lado la diversidad del gen DEFB103 que codifica un péptido antimicrobiano, la expresión de este gen por los queratinocitos, y la influencia del péptido sobre los melanocitos. Por otro lado, hemos analizado el efecto de la vitamina D sobre el los melanocitos, mediante RNA-Seq. Con este trabajo demostramos que la pigmentación de la piel puede ser modulada por moléculas que están implicadas en el sistema inmunitario. En particular la beta-defensinas 103 y la vitamina D activa, las cuales hemos visto que tienen la capacidad de influir en la expresión de genes melanogénicos. Además, el efecto de ambos factores parece estar relacionado con los niveles de pigmentación. El efecto de la vitamina D en los melanocitos es diferente con respecto al fenotipo pigmentario y su efecto en la pigmentación parece ser solo en melanocitos ligeramente pigmentados

Las Células Stem de Pulpa Dental (DPSCs; en inglés) son células madre extraídas de la pulpa dental de terceros molares de pacientes. Presentan unas propiedades que las convierte en un recurso especialmente interesante para la terapia celular, además de un gran potencial de diferenciación a distintos tipos de linajes y tejidos incluido hueso, cartílago, músculo y tejido adiposo. Este tipo de células madre son fáciles de obtener de pacientes, cultivar en forma de cultivo primario y amplificar gracias a su alta tasa de renovación. También presentan propiedades inmunosupresoras y buena tolerancia a los biomateriales, lo que las hace especialmente atractivas para su uso en clínica (ANEXO 1). Las vías de señalización Notch y Wnt/ß-Catenina son cruciales en el mantenimiento y la diferenciación de diferentes tipos de células madre y su conocimiento sería indispensable para conocer qué procesos gobiernan estos acontecimientos. El uso de proteínas recombinantes para la modulación de estas vías a diferentes tiempos y concentraciones podría ayudar en el control sobre el mantenimiento de estas poblaciones, sin que ello suponga una alteración definitiva o errores en el DNA, como ocurre con otras metodologías. Además, la modulación en la troncalidad viene acompañada de una remodelación del metabolismo y de la epigenética necesaria para garantizar la eficiencia de la reprogramación. El estudio de todos estos cambios fisiológicos en las DPSCs podría ser necesario para asegurar una terapia celular efectiva, precisa y segura (ANEXO 2). Las vías de señalización Notch y Wntß-Catenina tienen un papel importante en el mantenimiento y diferenciación de las poblaciones de células madre. En el caso de las DPSCs las vías Notch y Wntß-Catenina, conjuntamente, son indispensables en la expresión de marcadores de pluripotencia (Oct4, Nanog, Sox2, cMyc, Lin28, Rex1, Stella y Ssea1) y en el mantenimiento de la proliferación de células madre. Además, los tratamientos previos con BIO y WNT-3A mejoraron la eficiencia de dos protocolos de diferenciación de DPSCs a adipocitos y a osteocitos, respectivamente (ANEXO 3). La manipulación experimental de las vías de señalización Notch y Wnt-ßCatenina en DPSCs desencadena una remodelación del metabolismo. En la inhibición de la vía Notch, los cambios a nivel molecular se traducen en una ralentización del metabolismo a nivel glucolítico y lipídico. Por el contrario, en la activación de Wnt/ß-Catenina, se produce una aceleración del metabolismo glucolítico, una hiperactividad mitocondrial y una mayor formación de lípidos en forma de gotas lipídicas. Los efectos observados en condiciones de activación Wnt, se corresponden con una remodelación del metabolismo que podría estar directamente ligada con el aumento de la troncalidad que tiene lugar de manera simultánea en las DPSCs (ANEXO 3). A nivel epigenético, también se produce una remodelación en las DPSCs en condiciones de tratamiento activador de Wnt/ß-Catenina. Los niveles de metilación de DNA son menores con los activadores de Wnt/ß-Catenina, especialmente tras la exposición con la proteína recombinante WNT-3A. Por otro lado, el patrón de acetilación de histonas H3 y de metilación de histonas (H3K27me, H3K4me3 y H3K9me3), es mayor en condiciones de sobreactivación de Wnt. En cuanto a las condiciones de inactivación de Notch, no se observaron cambios a nivel epigenético. Los cambios epigenéticos se encuentran muy ligados a los cambios en el metabolismo y están directamente afectados por una remodelación previa del metabolismo que repercute en la epigenética, y son necesarios para sobrepasar la barrera epigenética y poder conseguir así una reprogramación más efectiva (ANEXO 4). En conclusión, las vías de señalización Notch y Wnt/ß-Catenina, son dos vías se señalización indispensables para la expresión de factores pluripotentes, la proliferación, la remodelación del metabolismo y remodelación epigenética, indispensables para garantizar una reprogramación efectiva. La reprogramación parcial controlada de estas células podría utilizarse para la mejora de protocolos de diferenciación existentes en cuanto a rapidez y efectividad de obtención de poblaciones celulares concretas y además diseñar nuevos protocolos no contemplados por complejidad.

Actualmente un 15% de parejas precisan ayuda para conseguir gestación. Un porcentaje de ellas precisará tratamientos de reproducción asistida, cómo la fecundación in vitro. En esta tesis nos preguntamos si pudiéramos pronosticar el estado fértil de la mujer mediante el análisis de la composición bioquímica del Líquido Folicular, y de esta forma podríamos optimizar los actuales tratamientos de reproducción asistida. Hemos descrito actividad enzimática en el líquido folicular de todas las peptidasas estudiadas en nuestra tesis, siendo DPPIV y NEP las de mayor actividad. No existen diferencias apreciables entre las actividades de las diferentes extracciones de la misma paciente, así como en las que se obtiene ovocito de las que no. Analizando los diferentes grupos de estudio, encontramos diferencias de actividad en PSA en las pacientes añosas. También hemos descrito la actividad de NEP por primera vez en la literatura, observando un descenso del tono opioidérgico en las pacientes mayores de 39 años. En las pacientes con endometriosis encontramos alteraciones de prácticamente todos los metabolismos peptídicos, especialmente el opioidérgico.

OBJETIVO: Comparar a largo plazo los resultados objetivos y subjetivos de la dacriocistorrinostomía transcanalicular láser (DCRTL) con aplicación de mitomicina C frente a la no aplicación del fármaco y evaluar si los resultados tienen relación con factores patológicos, demográficos, anatómicos, de lateralidad y quirúrgicos. MATERIAL Y MÉTODOS: Ensayo clínico que incluye 200 pacientes, intervenidos mediante DCRTL divididos en 2 grupos: grupo experimental (con aplicación de mitomicina C) y grupo control (sin aplicación de mitomicina C). El tiempo de seguimiento fue un año desde la realización de la cirugía. RESULTADOS: El éxito objetivo se alcanzó en el 70,7% de los pacientes pertenecientes al grupo experimental y en un 67,7% de los pacientes del grupo control. Las diferencias entre ambos grupos no es significativa (p=0.644). De todas las variables analizadas, la clínica preoperatoria es la única que se relaciona con el éxito obtenido, siendo que la epifora aislada presenta mejores resultados que si se presenta junto a dacriocistitis. CONCLUSIONES: El uso de Mitomicina C no ha demostrado mejorar los resultados de la DCRTCL. La epífora aislada se relaciona con mejor resultado objetivo que si se asocia a una dacriocistitis crónica.

Oocyte¿s maturation is a very important process in fertility. The oocyte meiotic maturation is a complex process whereby immature oocytes acquire the characteristics required for successful fertilization and embryogenesis. For that, immature oocytes arrested at the diplotene of prophase I (GV) must resume meiosis until the metaphase II of meiosis (MII). However, although all the mechanisms that leads for the reactivation of meiosis are not still known, there are known certain molecules that are able to modulate this process.That¿s way we were interested in the role that cannabinoids could have as IVM promoters because cannabinoid¿s molecular pathway is similar to the one by whuc oocyte¿s meiosis resumption is activated. That¿s why, the aim of this Doctoral Thesis was to study the function of the cannabinoid system in teh process of folliculogenesis, ovogenesis and oocyte maturation. Teh results obtained in the following PhD thesis confirm its participation. Beyond that we have seen that in fact, the phytocannabinoid (THC) in the IVM process, due to its possible use in clinic is most feasible and reliable than any synthetic cannabinoid. The most important goal of IVM method is that could be the only hope or an alternative for a not insignificant numer of patients.

Ikerketa honen helburua pertsona nagusi aktiboengan ariketa fisikoaren eteteak nolako eragina duen ezagutzea, bizi-kalitatean, funtzio fisikoan eta biomarkatzaileetan. Bederatzi hilabeteko ariketa fisiko gidatuaren ostean, hiru hilabeteko etete-aldiak ondorio negatiboak izan zituen bizi-kalitateko (SF-36) dimentsio guztietan (p <0,05) eta beherakada adierazgarria aurkitu zen oreka dinamikoan (p <0,001). Hanturazko parametroetan ez zen aldaketarik antzeman, HDL kolesterola aldiz handitu egin zen (p <0,001). Etete-aldiaren ostean adiponektina era kontrajarrian erlazionatu zen aldagai desberdinek, adiponektina maila altuak odoleko lipidoen maila hobearekin erlazionatzen ziren bitartean funtzio fisikoko emaitza okerragoekin zuen lotura. Gainera, etete-aldiaren ostean emakumezkoen kasuan adiponektina mantendu egin zen, gizonezko gehienek ordea, beherakada izan zuten. Horretaz gain, etete-aldi horretan zehar partaideen %18,4k erorketaren bat izan zuen eta pertsona horiek erorketa hori sufritu baino lehen jada bizi-kalitatean balore baxuagoak eman zituzten (p <0,05). Beraz, ariketa fisikoa eteteak ekarri ditzakeen ondorioak ekiditeko egokia izango litzake, alde batetik etete-aldi laburragoak egiten saiatzea eta beste aldetik etete-aldi horretan beraien kabuz egin ahal dituzten ariketak preskribitzea, orekako ariketei garrantzia emanez.

Se calcula que en la actualidad un 15% de parjas necesitan ayuda para conseguir su deseo de paternidad. Algunas de estas parejas realizaran tratamiento de IAC. La fragmentación del ADN se ha convertido en la última década en un importante marcador de la calidad del espermatozoide. Los altos valores de actividad observados en las diferentes fracciones espermáticas estudiadas, sugirieron que tanto las peptidasas como sus sustratos naturales podrían estar implicados en la fisiología seminal, a través de la regulación de péptidos fisiológicamente activos.Existen varios trabajos en los que se describen por un lado la regulación de la motilidad espermática mediada por diversas peptidasas implicadas en la regulación del metabolismo opioide (APN y NEP) mediante un mecanismo que implicaba a dicho sistema y por otro el propio papel de dicho sistema (opioides-peptidasas) y de sus receptores a través de un posible efecto directo sobre los espermatozoides.También se ha descrito que las peptidasas degradadoras de encefalinas, presentes en el líquido seminal, tienen un papel clave en la movilidad espermática.En esta tesis, se ha tratado de ver si estas enzimas y receptores podrían tener alguna relación con la integridad del ADN en el espermatozoide, comparando los resultados de actividad proteolítica, los niveles comparativos de peptidasas y receptores tanto en el metabolismo opioidérgico como en el SRA.

A nivel mundial, los partos prematuros representan el 11- 12% y se estima que dos tercios de ellos son recién nacidos prematuros tardíos (RNPT), es decir, nacidos entre las 34 y 36 semanas de gestación. En este estudio se planteó como objetivo diseñar, implementar y evaluar una intervención para el apoyo a la lactancia materna de los recién nacidos prematuros tardíos ingresados en la planta de maternidad del Hospital Universitario Cruces. La intervención se diseñó en base a cuatro ejes de acción: 1) Guía de cuidados específicos del RNPT dirigida a sus cuidadores principales; 2) Diario de alimentación; 3) Atención multidisciplinar coordinada y 4) Fototerapia en la habitación de la planta. Los resultados al alta para alimentación materna exclusiva, alimentación materna y fórmula fueron del 50,7%, 37,8% y 11,5%, en el grupo control; y de 68,4%, 25,9% y 5,7%, respectivamente, para el grupo intervención (p=0.002). El 62,9% de las madres del grupo control y el 17,5% del grupo intervención no hicieron ningún uso del sacaleches (p=0.000). En el grupo control se ofrecieron 76 primeros suplementos en partos y 101 en planta; mientras que en el grupo intervención, fueron 84 y 51, respectivamente (p=0.003).

Esta tesis analiza el proceso de enseñanza y aprendizaje en el Grado en Enfermería en el tema del cuidado a una persona que ha sufrido un ictus. Este estudio sigue un proceso de varias fases (identificación, revisión y análisis). En primer lugar se identifican los aspectos que componen una enseñanza relevante en este tema. Después, se presenta una revisión de la literatura sobre los métodos de enseñanza y aprendizaje utilizado con de los estudiantes del Grado en Enfermería a la hora de abordar el tema de los cuidados a los pacientes que han sufrido un ictus. Finalmente, esta tesis analiza el aprendizaje e investiga las dificultades en el aprendizaje de los estudiantes a la hora de abordar el cuidado de la persona que ha sufrido un ictus.

Pankreako minbiziak eta kolon-ondesteko minbiziaren metastasi hepatikoak heriotza ugari eragiten dituzte urtero. Hauek tratatzeko erabiltzen den teknika nagusienetariko bat kimioterapia da, zeinak pazienteengan zehar-efektu eragiten dituen. Gainera, askotan gaixoak ez dira sendatzen tumoreek farmakoekiko erresistentzia garatzen baitute. Arrazoi horiei aurre egiteko emaitza onak lotzen ari den estrategietako batek, farmakoekin batera konposatu naturalak erabiltzen ditu. Zentzu horretan, Ocoxin, elementu naturalez osaturiko nutrizio-osagarria da, zeinak propietate antioxidatzaile, antiinflamatorio eta immunoerregultazaileak dituen. Faktore hauek tumorearen hazkundearekin duten erlazio hertsia ezagututa, lan honetan Ocoxin jarabea erabili da hasieran aipaturiko minbiziak tratatzeko. Ocoxinek pankreako minbiziko eta kolon-ondesteko minbiziaren metastasi hepatikoko tumoreen hazkuntza murriztu eta kimioterapikoen zitotoxizitatea areagotzen du, kimioerresistentzia gutxitzen eta zehar-eketuak arintzen dituen bitartean.

La ICAM-1, la COX-2 y el Receptor de Manosa son moléculas implicadas en el desarrollo tumoral hepático por células de cáncer colorrectal. Las células tumorales colonizan el hígado formando un microambiente tumoral único, en el cual, las poblaciones estromales hepáticas, fibroblastos y macrófagos (HSCs y KCs) juegan un papel clave durante la colonización hepática. Pese a la importancia de estas poblaciones hepáticas, el papel de la ICAM-1, la COX-2 y el Receptor de Manosa apenas se ha estudiado en la formación del microambiente tumoral y en la respuesta estromal hepática.

La hipoacusia (HA) neurosensorial es la alteración neurosensorial más frecuente en la infancia, con una prevalencia de hasta 3-4/1000 en niños, de los cuales aproximadamente la mitad son de origen genético. La HA hereditaria se manifiesta de forma no sindrómica en el 70% de los casos y es una de las clásicas patologías genéticamente heterogéneas, con múltiples genes y tipos de herencia implicados que además varían en función de la población. Aunque las nuevas tecnologías como la secuenciación masiva han permitido identificar hasta 100 genes asociados a HA, en la actualidad la tasa diagnóstica no supera el 50%, por lo que en más de la mitad de los pacientes la causa genética sigue siendo desconocida. La secuenciación de exoma clínico podría ser una buena aproximación diagnóstica para aumentar el rendimiento diagnóstico de la HA no sindrómica e identificar nuevas variantes y/o genes relacionados con la misma. Esto permitirá además caracterizar por primera vez la población vasca, cuyo espectro mutacional podría presentar diferencias con lo descrito para la europea y la española, y definir nuevas correlaciones genotipo-fenotipo. Hemos estudiado una cohorte de 100 pacientes pediátricos con HA no sindrómica residentes en Euskadi mediante una aproximación secuencial basada en un estudio de primera línea de causas genéticas más frecuentes, seguido de secuenciación de exoma clínico y análisis de 4 paneles de genes asociados a HA con diferentes grados de evidencia. Los resultados obtenidos confirman la gran heterogeneidad genética de esta patología y demuestran que la aproximación utilizada aumenta la tasa diagnóstica respecto a lo descrito previamente (62% vs 40-50%), debido principalmente al panel de genes de alta evidencia y a los criterios de selección de los pacientes. El espectro mutacional de nuestra cohorte se asemeja a lo descrito para población española y europea. Hemos identificado variantes nuevas que nos han permitido reforzar la asociación con la HA de uno de los genes de evidencia moderada. Además, aportamos nuevas evidencias a las relaciones genotipo-fenotipo ya existentes y proponemos un fenotipo para una de las variantes identificadas.

Tesi honek ausazko entsegu kliniko bat barnehartzen du. Helburu nagusia ariketa fisikoan oinarritutako hiru esku-hartze desberdinen (osagai anitzeko ariketa fisikoko esku-hartzea, dual-task esku-hartzea, eta oinez ibiltzeko esku-hartzea) eraginkortasuna aztertzea da hirugarren adineko egoitzetan bizi diren adineko pertsonetan. Osagai anitzeko ariketa fisikoko eta dual-task esku-hartzeek funtzio fisikoa hobetu zuten arren, lehenengoak bakarrik hobetu zituen hauskortasuna eta afektibitate egoera. Emaitza horiek dual-task esku-hartzearen konplexutasuna eta bertaratze txikiagoarekin batera, ondorioztatzen dugu esku-hartze mota horrek ez duela onura gehigarririk ekartzen hirugarren adineko egoitzetan bizi diren adineko pertsonetan osagai anitzeko ariketa fisikoko esku-hartzeei dagokienez. Bestalde, osagai anitzeko ariketa fisikoko esku-hartzeak eta ibiltzeko esku-hartzeak parte-hartzaileen afektibitate egoera eta bizi-kalitatea hobetu bazuten ere, osagai anitzeko ariketa fisikoko taldeak hobekuntza handiagoak izan zituen funtzio fisikoan, baina era berean, ibiltzea, nahikoa izan zen parte-hartzaileen funtzionaltasuna mantentzeko. Esku-hartzeek ez zuten serumeko BDNF kontzentrazioan aldaketarik eragin. Arestian aipatutakoa kontutan hartuta, ondorioztatu dezakegu hiru esku-hartzeak eraginkorrak direla hirugarren adineko egoitzetan bizi diren adineko pertsonen funtzionaltasuna mantentzeko eta/edo hobetzeko frogatu dugu.

El carcinoma hepatocelular (CHC) es un cáncer altamente letal con una tasa de supervivencia a 5 años de aproximadamente 5%. Estudios previos han investigado la relación existente entre las estatinas y su potencial antitumoral. Además de su efecto sobre la biosíntesis del colesterol, las estatinas también tienen propiedades antineoplásicas a través de efectos anti-proliferativos, pro-apoptóticos, anti-angiogénicos, inmuno-moduladores y anti-infecciosos. Planteamos la hipótesis de que la pravastatina en combinación con sorafenib podría aumentar la supervivencia y el periodo libre de progresión en pacientes con CHC avanzado, siendo además un tratamiento seguro y bien tolerado. Se realizó un ensayo clínico fase II aleatorizado doble ciego mediante el cual se seleccionaron pacientes con CHC avanzado, que tras aleatorización recibieron placebo+sorafenib o pravastatina+sorafenib. La pravastatina asociada a sorafenib prolongó significativamente el tiempo hasta progresión, y no mejoró la supervivencia global respecto al tratamiento estándar. Factores etiológicos, estadio Child-Pugh, invasión vascular y trombosis venosa portal fueron confirmados como marcadores pronóstico basales. La toxicidad dermatológica se confirmó como marcador pronóstico de respuesta al tratamiento. La terapia combinada fue un tratamiento seguro y bien tolerado. Conclusión: el tratamiento combinado pravastatina+sorafenib es seguro y podría aportar cierto beneficio terapéutico a los pacientes.

La enfermedad hepática poliquística (PLD) abarca un grupo heterogéneo de colangiopatías genéticas caracterizadas por la dilatación del conducto biliar y el desarrollo de múltiples quistes biliares intrahepáticos (>10), que son la principal causa de morbilidad. Actualmente, las terapias quirúrgicas y/o farmacológicas disponibles tienen efectos modestos, siendo el trasplante hepático la única opción curativa. La mayoría de los genes causantes de PLD codifican para proteínas del retículo endoplasmático (RE) que participan en la biogénesis y transporte de proteínas de nueva síntesis. Por ello nos planteamos como hipótesis que, anomalías en la proteostasis del RE conducen a una situación de estrés de RE que puede subyacer la patogénia de la PLD y representar una nueva diana terapéutica. En este sentido, los niveles transcripcionales de varios factores de la respuesta a proteínas desplegadas (UPR) estaban aumentados en biopsias hepáticas de pacientes con PLD y ratas PCK, así como en cultivos primarios de colangiocitos poliquísticos de origen humano y murino, en comparación con los correspondientes grupos control. Asimismo, los colangiocitos poliquisticos presentaron un lumen reticular notoriamente dilatado e hiperactivación del proteasoma 20S. El tratamiento crónico de ratas PCK con el inhibidor del estrés de RE, ácido 4-fenilbutírico (4-PBA), redujo el peso y volumen del tejido hepático, así como el volumen de los quistes, en animales tratados con esta chaperona química (tanto en solitario como en combinación con tunicamicina), en comparación con el grupo control. In vitro, el 4-PBA disminuyó la expresión de los factores de la UPR y redujo la actividad del proteasoma 20S, frenando la hiperproliferación de los colangiocitos poliquísticos y su muerte celular. Conclusión: los colangiocitos poliquísticos experimentan mal plegamiento de proteínas, estrés de RE e hiperactividad del proteasoma 20S, lo que promueve la supervivencia celular y la cistogénesis hepática. Así, la restauración de la proteostasis del RE con 4-PBA retrasa la evolución de la cistogénesis hepática, representando una potencial estrategia terapéutica.

Background: Diabetic patients have prolonged cardiac repolarization and a higher risk of arrhythmia. Besides, diabetes activates the innate immune system, resulting in higher levels of plasmatic proinflammatory cytokines such as TNFa and IL1b, which are described to prolong ventricular repolarization. Methods: Most of the current knowledge on diabetic cardiac electrical remodeling derives from type 1 diabetic animals. Here, we characterize a metabolic model of type 2 diabetes with prolonged cardiac repolarization. Sprague-Dawley rats were fed on high fat diet (45% Kcal from fat) for 6 weeks, and a low dose of streptozotozin was intraperitoneally injected at week 2. Body weight and fasting blood glucose were measured and electrocardiograms to conscious animals were recorded weekly. Plasmatic lipid profile, insulin, cytokines and arrhythmia susceptibility were determined at the end of the experimental period. The transient outward K+ current and action potentials were recorded in isolated ventricular myocytes by patchclamp. Animals were also treated with PAP-1, an inhibitor of Kv1.3 channel that has an immunomodulatory role. Results: Type 2 diabetic animals showed insulin resistance, hyperglycemia and higher levels of plasma cholesterol, triglycerides, TNFa and IL1b than controls. They also developed bradycardia and prolonged QTc-interval duration that resulted in increased susceptibility to severe ventricular tachycardia under cardiac challenge. Action potential duration (APD) was prolonged in control cardiomyocytes incubated 24h with plasma isolated from diabetic rats. However, adding TNFa and IL1b receptor blockers to the serum of diabetic animals prevented the increased APD. Inhibition of Kv1.3 reduced the circulaiting cytokines including TNFa and IL1B. It had an antidiabetic effect improving insulin resistance and controlling the glucose while reduced the prolongation of QTc and the susceptibility to arrhythmia in the diabetic rats. Conclusions: The elevation of the circulating levels of TNFa and IL1b are responsible for impaired ventricular repolarization and higher susceptibility to cardiac arrhythmia in our metabolic model of type 2 diabetes. Thus, immunomodulation by inhibition of Kv1.3 has antidiabetic effects while improving the electrical alterations of the diabetic heart. These results make the immune system a potential target for the treatment of diabetes and its associated alterations.

El objetivo de esta Tesis fue abordar desde una perspectiva integradora, multidisciplinar y cuantitativa dos cuestiones fundamentales de la actividad sistémica de los organismos unicelulares que están profundamente interconectadas entre sí: (I) el papel del núcleo en la migración celular, y (II) los mecanismos esenciales de control de la migración celular. Estas investigaciones resultaron en 2 publicaciones en Nature Comunnications y Nature Scientific Reports.

Por medio de la presente Tesis Doctoral se pretende reflejar la influencia de diversas variables que intervienen en el rendimiento de los jugadores y jugadoras de waterpolo. De esta manera, proponemos un análisis en profundidad de los factores antropométricos y fisiológicos, la edad relativa, la lateralidad y el entrenamiento; con el fin de ayudar a los entrenadores y preparadores físicos de los clubes deportivos involucrados en los procesos de detección y entrenamiento a formular pautas y recomendaciones para la selección, preparación, control y rendimiento de los deportistas.

Tesi honek emakume inmigranteen Euskadiko osasun zerbitzuetarako sarbidea aztertzeko helburua dauka. Ikerketa kuantitatibo batean eta bi ikerketa kualitatibotan oinarritzen da. Lehenengo ikerketarako datu bilketa, kontsulta zenbakien kontaketaren bitartez egin zen. Bigarren eta hirugarren ikerketarako, elkarrizketen bidez egin zen. Lehenengo ikerketan, Euskadin 2012. urteko legearen aldaketak dohaineko klinika baten kontsulta kopuruan izan zezaken eragina ebaluatzeko, datuei erregresio analisi binomial negatiboa aplikatu genion. Bigarren eta hirugarren ikerketetan, edukiaren analisi kualitatiboaren metodologia aplikatu genuen. Hauen helburua, emakume inmigranteen sarbiderako oztopoak ezagutzeko nahian, dohaineko kliniketan lan egiten duten osasun profesionalen pertzepzioa ezagutzea eta Afrika Sub-Sahararreko emakume inmigranteen osasun sistemarekiko pertzepzioak eta esperientziak ezagutzea zen, hurrenez hurren. Lehenengo ikerketan, ez zen erlazio argirik aurkitu legearen aldaketa eta dohaineko klinikaren kontsulta kopuruaren artean. Bigarrenaren emaitzarik esanguratsuenek, sarbidean eragiten duten faktoreak, lau talde hauetan sailkatutako faktoreetan oinarritzen dela diote: 1) inmigranteen ezaugarri pertsonalak, haien jatorriarekin estu erlazionaturik daudenak; 2) osasun zentruetako langileen inmigranteenganako jokaera; 3) osasun sistemaren ezaugarriak eta funtzionamendua eta 4) eskakizun legalak. Hirugarren ikerketaren bitartez, aurreko faktoretaz aparte, arrazismo estrukturalaren eraginak ere inmigranteen osasun zerbitzuetarako oztopoa suposatzen duela aurkitu zen. Bitartean, legeei buruzko informazioa, akonpainamendua eta sostengua jasotzeak sarbiderako faktore erraztaileak kontsideratu ziren. Hauek, profesionalengandik, gizarte erakundengandik edo sare sozial pertsonalengandik jasotzen dituztelarik. Populazio zaurgarrienen osasun zerbitzuak jasotzeko eskubidea indartzeaz aparte, diskriminazioa ekiditeko, eskubideetan oinarritutako arretaren balioa indartu behar litzateke, osasun sistema barneratzaileagoa izan dadin.

La obesidad es un problema a nivel mundial que va asociada a numerosas alteraciones metabólicas, por lo que es necesario encontrar nuevas dianas terapéuticas para su tratamiento. El metabolismo de la metionina está estrechamente asociado a la obesidad. Su alteración en distintos puntos confiere resistencia al desarrollo de obesidad y comorbilidades asociadas. Por esto, quisimos investigar si el silenciamiento del gen Mat1a, responsable del enzima de la primera reacción del ciclo de la metionina, podrá tener efectos beneficiosos en el desarrollo de obesidad y sus comorbilidades. Para silenciar el gen Mat1a se emplearon oligonucleótidos antisentido (ASO) que se usaron sobre animales obesos alimentados con dieta rica en grasa o animales con obesidad genética. Además, se usaron animales con una deficiencia crónica de Mat1a (Mat1a-KO) que también se alimentaron con dieta rica en grasa. Los mecanismos implicados se investigaron con ratones deficientes en el factor de crecimiento de fibroblastos 21 (FGF21) en hepatocitos. Finalmente, el estudio de aterosclerosis se realizó en ratones deficientes en el receptor de lipoproteínas de baja densidad (LDLR) (Ldlr-KO) alimentados con una dieta occidental rica en grasa y colesterol. En todos estos modelos animales se analizaron parámetros físicos, bioquímicos, se analizaron las principales rutas metabólicas en hígado y tejido adiposo y se realizó un estudio histológico del hígado, tejido adiposo y aorta de los animales. El silenciamiento de Mat1a promovió la pérdida de peso de ratones obesos alimentados con una dieta rica en grasa sin cambios en la ingesta de los animales, mejoró la resistencia a insulina, redujo los niveles séricos de triglicérido, colesterol y ácidos grasos y evitó el desarrollo de hepatoesteatosis asociada a la obesidad. También se vio que los animales tratados con los ASO para Mat1a aumentaron su consumo energético y desarrollaron una mayor oxidación de ácidos grasos en el tejido adiposo marrón (BAT) junto con una mayor redirección de los lípidos del organismo hacia este tejido, una mayor lipólisis del tejido adiposo blanco (WAT) y una menor lipogénesis de novo en el hígado. Estos resultados se encontraron en todos los modelos animales estudiados, y estaban producidos por la secreción y acción en sus tejidos diana de FGF21 por los hepatocitos, en un mecanismo en el que estaba implicado, al menos en parte, el factor nuclear eritroide 2-relacionado 2 (NRF2). Además, el silenciamiento de Mat1a alteró la composición de lipoproteínas de ratones Ldlr-KO alimentados con una dieta occidental a unas características proaterogénicas. Esto indujo la progresión más rápida de placas recién formadas al tener un núcleo necrótico más grande y con más macrófagos apoptóticos. Sin embargo, en placas grandes no se vio efecto alguno. En conclusión, la falta de Mat1a induce la secreción de FGF21 que promueve la oxidación de ácidos grasos en BAT y su redirección hacia él, evitando el acúmulo de lípidos en otros tejidos como el hígado y protegiéndolo del desarrollo de esteatosis. Así el consumo de lípidos promoverá la pérdida de grasa observada. Por otra parte, la falta de Mat1a altera la composición de lipoproteínas que aceleran la progresión de placas recién formadas, pero no tienen efecto sobre placas ya avanzadas.

Durante el envejecimiento se produce una disminución funcional progresiva de los tejidos, a la cual subyace la pérdida del potencial regenerativo por alteraciones en el funcionamiento de las células madre/precursoras residentes del tejido. En la piel, una población de células precursoras dérmicas es trazada por la expresión de Sox2, conocido por su función en el mantenimiento de las células madre. En este tejido, los niveles de Sox2 modulan la transición entre diferentes estadios celulares gliales y perivasculares con capacidad multipotente. En este trabajo hipotetizamos que la disminución funcional dérmica que ocurre en el envejecimiento es consecuencia de alteraciones en las poblaciones de células precursoras Sox2+. Utilizando los modelos animales C57BL/6J y Sox2EGFP envejecidos cronológicamente, hemos encontrado alteraciones en los nichos dérmicos nervioso y vascular, en conjunto con una disminución in vitro en la capacidad proliferativa, en el potencial de diferenciación, y un aumento de la senescencia celular. Más aún, la cantidad total de células precursoras Sox2+ disminuye con la edad, pero esta pérdida es acusada en la fracción celular con altos niveles de expresión de Sox2, mientras que aquella con bajos niveles de expresión parece estar menos afectada por el envejecimiento. Estos cambios, producto de alteraciones proliferativas selectivas, afectan al potencial de diferenciación hacia los linajes neural y mesodérmico. De hecho, en el animal heterocigoto Sox2EGFP hay un mayor compromiso adiposo, incluso desde edades jóvenes, que es concomitante con una disminución de la celularidad, resultando en alteraciones tempranas de la estructura de la matriz extracelular dérmica. Los resultados de este trabajo proponen la importancia de Sox2 en el mantenimiento de la homeostasis dérmica durante el envejecimiento, a través de la regulación de diversas poblaciones celulares en la piel.

Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL) and Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL) are the most prevalent hematological cancers in children and elder patients respectively. Sometimes, standard treatments are not enough for curing these patients and new approaches, like immunotherapy need to be explored. In the last years, Chimeric Antigen Receptors (CARs) have arisen as one of the most promising immunotherapies. Usually these CARs are used along with T cells, developing CAR-T cells. Although autologous CAR-T cells have given very good results, their secondary side effects, like cytokine storm and neurotoxicity, are quite severe; and the CAR-T product manufacturing takes 5 weeks minimum. Because of that, we suggest NK cells as a vehicle for allogeneic CAR based treatments, as they do not cause secondary side effects or graft versus host disease. In this thesis, we look for the best cell source in order to obtain the perfect NK cells for CAR based treatments.

Durante 6 temporadas completas comprendidas entre 2013 y 2019 se llevó a cabo un estudio observacional basado en el registro prospectivo y sistemático de todas las lesiones producidas en el seno de un Club de fútbol profesional, del tiempo de exposición individualizado en entrenamientos y partidos y de una serie de características y factores asociados a la ocurrencia de dichas lesiones para su posterior análisis. El objetivo de la investigación realizada fue conocer en detalle la epidemiología descriptiva del equipo en ese período de tiempo con especial atención a los datos de incidencia y burden, analizar la posible relación entre disponibilidad y resultados e identificar factores de riesgo que ayudasen a definir contextos ambientales de mayor riesgo o a diseñar e implementar intervenciones tanto de carácter preventivo como terapéutico. Participaron en el estudio 51 jugadores profesionales y se registraron un total de 382 lesiones, siendo los tipos más frecuentes las lesiones musculares (48%), las contusiones (23%) y las lesiones articulares (16%). El análisis general mostró una incidencia total de 8.8 lesiones/1000h (IC 95%: 8-9.7), un burden de 116 días de baja/1000h (IC 95%: 105-129) y una prevalencia de lesiones del 79% (RIC 72-83). No se encontraron asociaciones significativas entre disponibilidad en entrenamientos o partidos y resultados pero sí un leve efecto positivo de una menor diferencia entre ambas. En cuanto a los factores de riesgo, la presencia de otra lesión anterior durante la misma temporada se muestra como un factor de peso, también los períodos competitivos frente a las pretemporadas, los partidos frente a los entrenamientos o la posición de delantero. Por otro, lado los partidos disputados con menos tiempo de recuperación o la falta de experiencia no se comportan como factores relevantes en este estudio. La gestión de la carga, por su parte, es uno de los factores sobre los cuales mayor posibilidad de intervención existe con un fin protector ante lesiones. Los hallazgos descritos en este trabajo, al igual que la información producida en la bibliografía especializada sobre esta materia junto con la experiencia profesional deben ser resumidas, simplificadas y compartidas regularmente con técnicos y jugadores para diseñar intervenciones individualizadas, poco invasivas e integradas en el contexto de cada equipo con el fin de intentar elevar el nivel de protección ante las lesiones.

Antecedentes y objetivos: La Esclerosis Múltiple es una patología neurológica de origen inflamatorio que afecta fundamentalmente al sistema nervioso central, tratándose de la causa no traumática de discapacidad más frecuente en jóvenes adultos. La neurorehabilitación permite mantener y mejorar la marcha de las personas que viven con EM (pvEM), siendo la terapia asistida por robot una de las desarrolladas en los últimos años. En los casos en los que las pvEM necesitan ayuda técnica para caminar, su monitorización no es incluida habitualmente a la hora de valorar la marcha. El ¿Smart-tip¿ es un nuevo dispositivo que puede dar solución a esta carencia. Sin embargo, no se conocen las cualidades psicométricas de los parámetros captados por el citado sistema. Por ello, los objetivos del presente trabajo son: 1. Identificar los métodos de valoración utilizados en los ensayos clínicos aleatorizados con grupo control (ECA) de reeducación de la marcha en pvEM; 2. Evaluar las cualidades psicométricas de fiabilidad y validez del ¿Smart-tip¿ en pvEM; 3. Evaluar la sensibilidad del ¿Smart-tip¿ en pvEM. Metodología: Se han realizado tres estudios diferentes para dar respuesta a cada uno de los objetivos: 1. Revisión sistemática de la literatura; 2. Estudio transversal en una muestra de 30 pvEM; 3. Estudio cuasiexperimental de reeducación de la marcha mediante terapia asistida por robot en un grupo de pvEM. Resultados: 1. Existe una gran heterogeneidad en los métodos de valoración de la marcha en los 46 ECA de reeducación en pvEM analizados y ninguno de ellos evalúa la forma de utilización de la ayuda técnica; 2. El Error Estándar de la Medida presenta porcentajes de error inferiores al 4%, y los parámetros fuerza máxima relativa, número de ciclos y amplitud anteroposterior total, correlacionan de forma estadísticamente significativa con las escalas de valoración SPPB y TUG; 3. La intervención de reeducación de marcha asistida por robot reduce la fuerza máxima relativa y la amplitud lateral total y aumenta la amplitud anteroposterior total, de manera significativa. Conclusiones: 1. La forma de utilización de la ayuda técnica no es tenida en cuenta en las valoraciones de los ECA de reeducación de la marcha en pvEM; 2. El ¿Smart-tip¿ es un dispositivo fiable y válido para su utilización en pvEM: 3. El ¿Smart-tip¿ parece poseer una sensibilidad superior a las escalas de valoración utilizadas habitualmente.

Entrenamenduen osteko errekuperazio desegokiak kirolariengan estres fisiologiko handia, gainkarga sintomak eta nekea eragin ditzake, errendimendua gutxituz. Horregatik, eguneroko entrenamenduak ziurtatzeko eta lesionatzeko arriskuak murrizteko, errekuperazioa egokia izatea gomendatzen da. Horrenbestez, ikerketa honen helburua izan da ezagutzea errekuperazio metodo desberdinek, hain zuzen ere, masajeak, ur hotzeko murgilketak (UHM) eta T.E.C.A.R. terapiak (ingeleratik Transfert Electrical Capacitive and Resistive), intentsitate altuko entrenamendu baten ostean korrikalari popularretan eragiten dituzten aldaketak parametro biomekanikoetan eta fisiologikoetan, laktatoan, esfortzu pertzepzioan (kardiobaskularra eta muskularra) eta malgutasunean. Ikerketa honetan 48 gizonezko korrikalari popularrek parte hartu zuten. Korrikalariei malgutasuna neurtu zitzaien eta treadmill testa egiten zuten bitartean parametro biomekanikoak, parametro fisiologikoak, laktatoa eta esfortzu pertzepzioa (kardiobaskularra eta muskularra) neurtu zitzaizkien. Ondoren, kirolariek masajea, ur hotzeko murgilketa edo T.E.C.A.R. terapia tratamendua jaso zuten. Kontrol taldea bermatzeko subjektu bakoitza bere kontrola izan zen. Emaitzei dagokionez, masajeak aldaketa adierazgarri positiboak eragin zituen parametro biomekanikoetan, fisiologikoetan eta esfortzu pertzepzioan (kardiobaskularra eta muskularra). Aldiz, UHM-k emaitza adierazgarri hobeak eragin zituen soilik esfortzu pertzepzio muskularrean 16 km·o-1-ko abiaduran. Bukatzeko, T.E.C.A.R. terapian hobekuntza adierazgarri positiboak aurkitu ziren parametro biomekanikoetan.

Las mujeres que se someten a técnicas de reproducción asistida (TRA) con frecuencia experimentan un impacto negativo en su calidad de vida y desajuste emocional ante el tratamiento, sin embargo, el efecto de cada una de las fases del tratamiento y de los fármacos hormonales utilizados en la estimulación ovárica de las TRA convencionales ha sido poco estudiado. En los resultados de esta tesis se ha observado que el ajuste emocional y la calidad de vida de las mujeres infértiles disminuye a lo largo de las fases del tratamiento y una parte considerable presenta trastornos clínicos para ansiedad y/o depresión. Además, un peor estado emocional y un mayor deterioro de la relación de pareja se asociaron con una menor probabilidad de embarazo. Las mujeres bajo el tratamiento con mayor carga hormonal mostraron peor tolerancia a la TRA, una mayor alteración de su vida diaria, más síntomas mentales y físicos, y un mayor deterioro de los componentes de la relación de pareja al finalizar el tratamiento, en comparación con las mujeres bajo el tratamiento sin carga o mínima carga hormonal. Estos resultados abren nuevas vías de investigación para el desarrollo de tratamientos con menores cargas hormonales y subrayan la necesidad de una atención sanitaria que incorpore el cuidado emocional de la mujer infértil, mejorando así tanto la experiencia de las personas infértiles como la eficiencia de las técnicas utilizadas en medicina reproductiva.

Las terapias de reproducción asistida (TRA) son esenciales para el tratamiento de una cantidad creciente parejas con problemas reproductivos. La mejora de estas técnicas pasa, entre otros aspectos, por el hallazgo de marcadores bioquímicos, que sean sencillos de cuantificar, que contribuyan a una mejor elección de tratamiento para cada paciente y a una gestión más eficaz de los procesos relacionados con estas técnicas. En este sentido, el estudio de los sistemas peptídicos de comunicación intercelular que regulan procesos clave de la fisiología reproductiva como la gametogénesis, la maduración espermática y ovocitaria, la fecundación, el desarrollo embrionario o la implantación uterina del embrión, nos proporcionarían un buen número de posibles dianas cuantificables asociados a los citados procesos. En esta tesis, de han estudiado las actividades de 4 enzimas peptidasas, APN, DPPIV, PEP y NEP, degradadoras de péptidos con actividad biológica en diferentes fracciones seminales de muestras de pacientes. Estas muestras seminales fueron, además, empleadas para la obtención de embriones por medio de técnicas de reproducción asistida. De esta manera, las variaciones en las actividades seminales de estas enzimas han podido ser relacionadas estadísticamente con indicadores de calidad seminal, indicadores de calidad de los embriones obtenidos e indicadores de éxito gestacional analizados en las terapias de reproducción asistida. Los resultados permiten concluir que los niveles de actividad de estos enzimas en las fracciones de líquidos seminal, prostasomas o espermatozoides de las muestras estudiadas tienen relación estadísticamente significativa con la fragmentación celular, la simetría del embrión o el número de células en estadios tempranos del desarrollo, en embriones obtenidos a partir de esas muestras.

En el presente trabajo se ha estudiado la función de los microRNAs en linfoma de célula B. Por un lado se analizó la presencia de mutaciones en sitios de unión de microRNAs que habían sido identificadas en pacientes con linfoma folicular y que habían sufrido una transformación a un linfoma de alto grado. El análisis funcional de dichas mutaciones reveló que mutaciones en genes clave en linfomagénesis como son EZH2 y BCL2 afectan a la unión del microRNA que los regula y por tanto promueven la desregulación de los mismos. Por otro lado, se identificó el targetoma del microRNA-155, conocido oncomiR en linfoma B, mediante la técnica experimental denominada PAR-CLIP con el fin de identificar biomarcadores de clasificación de los subtipos moleculares del linfoma B difuso de célula grande aplicables en la clínica. Estos subtipos difieren, entre otras cosas, en la expresión de este microRNA. Los resultados mostraron que los genes diana identificados en el subtipo más agresivo participan en vías de señalización que, al ser inhibidas promoverían la progresión tumoral. Los resultados de esta tesis doctoral demuestran la relevancia de los microRNAs en linfoma B y la importancia de la identificación de sus genes diana para comprender el significado biológico de la expresión disfuncional de microRNAs a menudo identificada en cáncer.

Este trabajo explora la relación entre los hábitos sedentarios de ocio pasivo multimedia y sus determinantes, el perfil obesogénico y la adherencia a la Dieta mediterránea en escolares del Gran Bilbao. 515 participantes de 19 colegios con rango socioeconómico alto, medio y bajo, y sus familias/tutores, cumplimentaron tres cuestionarios auto-informados sobre las características sociodemográficas, sus hábitos sedentarios de ocio pasivo multimedia según la recomendación de tiempo máximo diario propuesta por la Academia Americana de Pediatría < 2h/día o ¿¿ 2 h/día, entre semana y durante el fin de semana, y sus hábitos de alimentación. Se les pesó y talló, se calculó el IMC y se les clasificó en las categorías del International Obesity Task Force (IOTF): bajo peso, saludable, sobrepeso y obesidad. Las familias/tutores reportaron el peso y altura, se calculó el IMC y se clasificaron en dichas categorías. La adherencia a la Dieta mediterránea se calculó mediante el Índice KIDMED. El análisis estadístico se realizó con SPSS v.23, siendo el nivel de significación aceptado p < 0,05. Los/as escolares de Secundaria y los niños eran más sedentarios, tenían más obesidad/sobrepeso y peores hábitos de alimentación. La estructura familiar, el trabajo materno, las normas familiares de control del uso de los dispositivos, los consejos familiares sobre el sedentarismo, las rutinas de utilización, la disponibilidad en el hogar y el acceso en la habitación a los dispositivos multimedia, así como la autoeficacia y autorregulación para el comportamiento, se reconocieron como determinantes de los hábitos sedentarios de ocio pasivo multimedia. Además, los/as escolares en Secundaria tenían más sobrepeso/obesidad y peor adherencia a la Dieta mediterránea que en Primaria, y se encontró que los/as escolares con baja adherencia a la Dieta mediterránea presentaban mayor probabilidad de tener sobrepeso/obesidad y de jugar a videoconsola ¿¿ 2 h/día, especialmente entre los niños. Es necesario continuar abordando los hábitos sedentarios de ocio pasivo multimedia y sus determinantes, como objetivos clave para promover la salud y mejorar la adherencia a la Dieta mediterránea de los/as escolares, especialmente entre los niños, antes de llegar a Secundaria.

El fotoenvejecimiento es un proceso complejo caracterizado por un conjunto de alteraciones cutáneas inducidas por la exposición continuada a la radiación UV-B y el consecuente estrés oxidativo celular. Actualmente, la terapia celular con células madre mesenquimales (MSCs) surge como una alternativa prometedora en la prevención del fotoenvejecimiento, gracias a su capacidad de regeneración celular, sus propiedades pro-angiogénicas y su protección frente al estrés oxidativo. Sin embargo, a pesar de su potencialidad terapéutica, la utilización de MSCs no está exenta de dificultades, fundamentalmente relacionadas con el mantenimiento de su viabilidad, propiedades y función antes y después de la implantación in vivo. Para hacer frente a estas limitaciones se han desarrollado distintas estrategias de pre-acondicionamiento in vitro de las MSCs basadas, entre otras, en incrementar la resistencia frente al estrés oxidativo mediante su exposición durante un corto periodo de tiempo a bajas concentraciones de H2O2. Dicho pre-acondicionamiento permite además estimular la actividad paracrina de dichas células, la cual puede reducir los factores pro-inflamatorios y limitar el desarrollo de fibrosis. En este trabajo hemos demostrado, en primer lugar, que las células madre mesenquimales humanas derivadas de tejido adiposo (hASCs, unas de las más frecuentemente utilizadas en medicina regenerativa) poseen mayor resistencia frente al efecto nocivo de la radiación UV-B respecto a la de los HFFs. En segundo lugar, que el pre-acondicionamiento de las hASCs con H2O2 aumenta la capacidad de respuesta de estas células al estrés oxidativo causado por la radiación UV-B, evidenciado por la mayor actividad del sistema antioxidante celular inducido por Nrf2, el aumento de su viabilidad y de su capacidad de migración. En tercer lugar, hemos demostrado, que el tratamiento con el medio acondicionado (CM) de las hASC preacondicionadas (PC/CM) ejerce un efecto citoprotector de los HFFs frente al daño lesivo de la radiación UV-B, demostrado por un aumento de la viabilidad y disminución del porcentaje de apoptosis y de senescencia de estas células. Además, ante dichas condiciones lesivas, se reducen la síntesis de MMP-1 y el efecto deletéreo de dicha radiación sobre la capacidad migratoria y sobre la síntesis de colágeno tipo I de dichas células, fundamentales en el proceso de remodelación de la MEC y de regeneración dérmica. En conclusión, el tratamiento con el CM de las hASCs pre-acondicionadas con H2O2 ejerce un efecto protector de los HFFs frente a la radiación UV-B, lo que sugiere que la actividad paracrina de los derivados de las hASCs puede resultar una terapia prometedora en la prevención del fotoenvejecimeinto.

In the field of regenerative medicine, it has been pointed out the relevance of human adipose derived stem cells (hASCs) for cell therapy. They can be easily obtained, have low immunogenicity, and secrete soluble factors that could regulate neuroinflammation and oxidative stress. However, their transplantation at the site of injury results in a low percentage of survival and engraftment, mainly due to the harsh microenvironment they encounter. To address this issue, it is imperative to pre-adapt cells, so that they resist harmful environmental factors such as oxidative stress. In this study, we preconditioned hASCs (PC-hASCs) with low doses of H2O2 and evaluated their resistance to an oxidative stress insult. PC-hASCs displayed lower levels of ROS, apoptosis and cytotoxicity than hASCs, indicating their increased capacity to resist to oxidative stress. In addition, we analyzed the molecular and bioenergetic mechanisms underlying the survival and adaptation of PC-hASCs under oxidative stress. On these conditions, PC-hASCs i, reduce intracellular ROS levels by overexpressing the transcription factor NRF2 and their related antioxidant enzymes HO-1, SOD-1, GPx-1, and CAT; ii, reduce the secretion of pro-inflammatory molecules COX-2 and IL-1ß by attenuating the expression of NF-¿B, and iii, increase the total ATP production rate by adapting their metabolism in order to meet the bioenergetic demand required to survive. Finally, we evaluated the therapeutic role of PC-hASCs to overcome the deleterious effect of oxidative stress in an oligodendroglial cell population, and proved that PC-hASCs restored cell viability and diminished the intracellular ROS levels of these damaged oligodendrocytes by promoting their antioxidant response. Altogether, these findings support that PC-hASCs, given their beneficial advantages, might be considered an important breakthrough in cell¿based therapies.

Las propiedades terapéuticas de los derivados hemáticos se basan en su capacidad para estimular la reparación y regeneración de diferentes tejidos, gracias a los factores de crecimiento y proteínas bioactivas presentes en ellos. Valoramos la capacidad del s-PRGF, en diferentes concentraciones, de favorecer la proliferación, migración y diferenciación de las células epiteliales corneales, así como su capacidad quimiotáctica, de favorecer adhesión y maduración epitelial, mantener el estado indiferenciado de las células madre limbares. Además , valoramos su combinación con moléculas bioadhesivas con objeto de mejorar su eficacia. En concreto, el s-PRGF ha demostrado ser un nuevo tratamiento alternativo particularmente prometedor, pero su combinación con las moléciulas bioadhesivas no aporta ventajas in vivo respecto al uso del s-PRGF libre.

Despite the tremendous potential of Toll-like receptor (TLR) 4 agonists in cancer immunotherapy, only some lipopolysaccharides (LPS) isolated from particular bacterial strains or synthetic structures like monophosphoryl lipid A (MPLA) are able to avoid toxic overactivation of the immune system while retaining adequate immunogenicity to act as vaccine adjuvants[1] . For cancer immunotherapy applications, the delivery of TLR4 agonists and their immunostimulatory activity modulation can be improved using nanoparticles. Moreover, combination of vaccines with immune checkpoint blockade (CPB) strategies could overcome the intrinsic weaknesses of vaccines and CPB monotherapies[2]. Here, we developed a nanovaccine by incorporating different LPS-related structures into nanoparticle-filled phospholipid micelles (mNPs) through a self-assembly process, exploiting the amphipathic structures of the adjuvants creating a nano-adjuvant for efficient vaccine delivery and potent cancer immunotherapy. The structurally unique LOS of the plant pathogen Xcc was incorporated into phospholipid micelles encapsulating oleic acid-coated 6 nm iron oxide nanoparticles (mIONPsp-Xcc LOS), producing stable pathogen-mimicking mNPs with ideal size, charge and hydrophobicity for targeting antigen presenting cells in the lymph nodes. The antigen OVA was attached to mIONPsp via a hydrazone bond (mIONPsp-HyNic-OVA) creating a NP-based antigen delivery vehicle and enabling rapid, easy-to-monitor and high yield antigen ligation at low concentrations[3] . The protective effect of mIONPsp-HyNic-OVA formulated with mIONPsp-Xcc LOS as adjuvant was investigated in mice against the highly aggressive model for murine tumor immunotherapy, B16-F10 melanoma expressing OVA. The results showed that the nanovaccines led to a higher-level tumor antigen-specific cytotoxic T lymphocyte (CTL) effector and memory responses without inducing toxicity, and that when combined with abrogation of the immunosuppressive programmed death-ligand 1 (PD-L1), provided 100% long-term protection against repeated tumor challenge[4]. The mIONPsp and antigen conjugation strategy in combination with immune checkpoint inhibition of PD-L1 represent a promising approach to improve cancer immunotherapy of vaccines exploiting TLR4 agonists. [1]: Mastelic, B. et al., Mode of action of adjuvants: Implications for vaccine safety and design. Biologicals 38, 594¿601 (2010). [2]: Zhuting, H. et al., Towards personalized, tumour-specific, therapeutic vaccines for cancer. Nature Reviews Immunology 18, 168¿182 (2018). [3]: Blanco-Canosa, J. B. et al., Rapid covalent ligation of fluorescent peptides to water solubilized Quantum Dots. J. Am. Chem. Soc. 132, 10027¿10033 (2010). [4] Traini, G. et al., Cancer immunotherapy of TLR4 agonist-antigen constructs enhanced with pathogen-mimicking magnetite nanoparticles and checkpoint blockade of PD-L1. Small 15, 1803993 (2015).

El sistema opioide está involucrado en la mayor parte de los procesos implicados en la reproducción y una desregulación de cualquiera de sus componentes, tanto por agentes exógenos como por patologías propias, podría provocar una disfuncionalidad del aparato reproductor. Por ello es importante conocer en qué procesos los opioides ejercen una regulación y las vías por las cuales la llevan a cabo. El objetivo de esta tesis es contribuir al conocimiento del sistema opioide, en concreto del receptor mu opioide (MOR), en el sistema reproductor haciendo una aproximación tanto descriptiva como funcional en tres procesos clave de la reproducción: la maduración de los ovocitos, la capacitación de los espermatozoides y el ciclo endometrial. Los resultados obtenidos en esta tesis indican que MOR está presente e involucrado en la regulación de la maduración ovocitaria, la capacitación de los espermatozoides y el ciclo endometrial. En cada uno de estos eventos, tanto la presencia/localización como la regulación ejercida por MOR varía, sugiriendo una regulación en su función dependiendo del proceso en el que actúe e incluso del momento del ciclo reproductivo. Estos resultados son de gran importancia debido a la amplia exposición a fármacos opiáceos frente a la que nos encontramos hoy en día. Además, abren nuevas vías de investigación en la prevención de la esterilidad, en el desarrollo de nuevas técnicas terapéuticas para patologías en las que el sistema opioide esté relacionado y en la mejora de las técnicas de reproducción asistida actuales.

El edadismo o discriminación por edad, discriminación cada vez más prevalente en nuestra sociedad, influye negativamente en la salud y autonomía de las personas mayores. Aunque es un tema candente, destaca la ausencia de estudios que comprendan este tipo de discriminación de manera integral o multidimensional, además de que pocos estudios han analizado a las personas mayores institucionalizadas. Por otro lado, a pesar de la importancia de la educación en la prevención del edadismo, existen pocas intervenciones educativas aleatorizadas y controladas para mayores a los que se les realiza un seguimiento a medio plazo. Este trabajo pretende analizar la relación entre los estereotipos negativos del envejecimiento y variables independientes físicas, psicológicas y sociales en personas mayores institucionalizadas (ESTUDIO I) y no institucionalizadas (ESTUDIO II); además de diseñar e implementar una sesión educativa combinada con un visionado de videos para mejorar la percepción del envejecimiento de personas mayores que viven en sus hogares, comparándolo con un grupo control (solo videos) y midiendo su efecto a corto (1 semana) y medio plazo (1 mes) (ESTUDIO III). Mientras que en el primer objetivo se construyeron modelos según lugar de residencia y sexo mediante un modelo linear generalizado (ESTUDIOS I & II), para el segundo se utilizó una ANOVA de medidas repetidas (ESTUDIO III). La variable dependiente en todo momento fue el resultado del cuestionario de estereotipos negativos hacia la vejez (CENVE). Los modelos derivados del ESTUDIO I & II, difirieron según el lugar de residencia y el sexo. Entre las personas mayores residentes en centros sociosanitarios (ESTUDIO I), los hombres, sin participación en actividades de los centros, más años institucionalizadas, menos autónomas en las actividades instrumentales de la vida diaria (AIVD), y con una limitación física mínima (en comparación con limitación leve), fueron las que reportaron una percepción más negativa del envejecimiento. Al mismo tiempo, los hombres institucionalizados que refirieron más estereotipos negativos resultaron ser los que trabajaron en la agricultura (en comparación a servicios), que no participaron en actividades del centro, que llevaban más tiempo institucionalizados y con menos autonomía en las AIVD. Las mujeres institucionalizadas de menor edad mostraron más estereotipos. En cuanto a las personas mayores que residían en sus hogares (ESTUDIO II), las más jóvenes, con estudios superiores, con una pensión de jubilación mayor, nacidas en la Comunidad Autónoma del País Vasco (CAPV), que no ejercieron como cuidadores/as de familiares enfermos y con una mejor calidad de vida, resultaron ser las que mostraron una visión del envejecimiento menos estereotipada. Los hombres de esta muestra, más jóvenes, con menos enfermedades crónicas, con más fuerza en la mano y con menos síntomas de ansiedad y depresión concibieron el envejecimiento de forma más positiva. A su vez, las mujeres no institucionalizadas con estudios superiores, con las pensiones de jubilación más elevadas, nacidas en la CAPV y con una mejor calidad de vida presentaron una percepción más positiva del proceso de envejecer. Los/as participantes del grupo experimental (ESTUDIO III), lograron reducir significativamente el número de estereotipos negativos del envejecimiento y del carácter y personalidad tanto a corto como a medio plazo, siendo su tamaño de efecto grande y superior al del grupo control, existiendo diferencias estadísticamente significativas entre ambos grupos. El grupo control no mostró cambios. Al no haber diferencias significativas entre las mejoras a corto y medio plazo, puede afirmarse que las mejoras logran mantenerse a medio plazo. El edadismo, además de asociarse a variables de distintas dimensiones, ha de ser abordado de distinta forma según el lugar de residencia y el sexo. A su vez, la intervención educativa diseñada en el presente trabajo, ha resultado ser un medio eficiente para combatir el edadismo a corto y medio plazo, siendo necesarios más estudios que corroboren dichas mejoras a largo plazo.

Estudio que evaluar las adaptaciones cardiovasculares centrales (remodelado ventricular) y periféricas (función endotelial y lípidos plasmáticos) a diferentes programas supervisados de ejercicio aeróbico interválico de alta intensidad (HIIT, bajo vs alto volumen) durante 16 semanas en personas que han sufrido un IAM en comparación con un grupo control (GC) sin supervisión que recibe recomendaciones individualizadas. Los resultados demuestran que las adaptaciones beneficiosas a nivel cardiovascular al HIIT se producen incluso con cargas de entrenamiento de bajo volumen. A nivel cardiaco, el principal efecto observado es la prevención del remodelado ventricular deletéreo tras un IAM, y a nivel vascular periférico, se evidencia una mejoría de la función endotelial mediada por la reducción de estrés oxidativo, entre otras. Al mismo tiempo, HIIT genera un aumento del HDL y apoA-I, denominado transporte reverso de colesterol, lo que confiere a estos pacientes una mejora en el riesgo cardiovascular de manera relevante.

Ikerketa honetan, hezur-dentsitate maila maximoa lortzear dauden unibertsitate gazteen gorputz-osaerak, elikadura-ohiturek, jarduera- eta ariketa fisikoak, egoera fisikoak eta bestelako bizi-ohiturek, hezur-zurruntasunarekin duten lotura aztertzea izan da. Hezurrean, gihar-ehunak positiboki eta gantz-ehunak negatiboki erlazionatzeko joera dute; izterreko perimetro positiboki (p<0.001) eta tolestura negatiboki (p=0.008) erlazionatzen dira hezur-zurruntasunarekin. Jarduera fisikoa intentsitate maila neurrizko-kementsuan (p=0,035) eta oso kementsuan aritzea (p=0,096) hezur-zurruntasun handiagoarekin erlazionatzen da. Gainera, emakumeen koadrizepsaren gihar-indarrak (p=0,016) eta gizonetan gaitasun aerobikoak (p=0,096) hezur-zurruntasuanrekin lotura positiboa dute. Inpaktu karga-maila handia, ezohiko inpaktua eta gabeko ariketa fisikoak dira hezur-zurruntasun handiagoarekin erlazionatzen dira. Gainera, ariketa fisikoa eskola garai guztietan zehar modu jarraian egitea hezur-zurruntasunaren handiagoarekin erlazionatzen da (p=0,007).

La hipoxia es una de las principales características de los tumores sólidos. A medida que el tumor crece, se generan regiones a las que no llega el suministro de oxígeno y nutrientes debido a la distancia que se encuentran los vasos sanguíneos. Bajo esta circunstancia, las células activan una serie de respuestas para poder sobrevivir, la mayoría de ellas mediadas por los factores de transcripción HIF (del inglés, hypoxia induced factors). HIF está formado por una subunidad ¿ sensible a los niveles de oxígeno, y una subunidad ß. En situaciones normales, la subunidad ¿ es hidroxilada, lo cual permite la unión del complejo von Hippel Lindau (VHL) que estimulará su degradación proteosomal. Sin embargo, en condiciones de hipoxia, HIF¿ no es hidroxilada y puede translocarse al núcleo para dimerizar con la subunidad ß y promover la transcripción de genes para hacer frente a la escasez de oxígeno y promover el desarrollo tumoral. En este sentido, el carcinoma renal de células claras (ccRCC, del inglés clear cell Renal Cell Carcinoma) es un modelo de estudio importante de los factores de transcripción HIF, no solo porque el 80% de los casos presentan el gen VHL inactivo, sino también porque HIF1¿ y HIF2¿ tienen efectos opuestos en la progresión tumoral. En esta tesis se ha podido observar que HIF2¿ es importante en el crecimiento tumoral, sobre todo cuando la densidad celular es baja, como ocurre al inicio de la enfermedad o de las metástasis. Asimismo, HIF2¿ suprimió la capacidad de migración celular in vitro, pero estimuló la capacidad de invasión tanto in vitro como in vivo, demostrando que HIF2¿ también ejerce un papel fundamental en el desarrollo de las metástasis. Por otro lado, a diferencia de la oxidación fosforilativa que las células llevan a cabo en condiciones normales para obtener la energía, las células tumorales redirigen el metabolismo a la glicolisis aerobia, incluso en presencia de oxígeno, efecto principalmente mediado por HIF1¿. De este modo, las células de ccRCC presentaron menor capacidad de respiración mitocondrial debido a los elevados niveles de HIF2¿. Por otro lado, la hipoxia genera un ambiente inmunosupresor dentro del tumor, impidiendo, por un lado, el establecimiento de células inmune efectoras y, por otro lado, promoviendo la presencia de células inmunosupresoras. La vía del interferón tipo I, importante en la respuesta inmune contra agentes infecciosos cuando detecta material genético foráneo y también relevante en la progresión tumoral, se vio disminuida en condiciones de hipoxia, promoviendo el efecto inmunosupresor. Esta supresión se detectó tanto en células tumorales como en células normales y en condiciones basales o tras haber estimulado la vía con un agente externo que simula ARN de doble cadena (dsRNA), mostrando que el efecto inmunosupresor de la hipoxia es general. Las mitocondrias se han descrito como orgánulos altamente inmunogénicos, debido a su origen bacteriano, y recientemente se ha demostrado que el ARN de origen mitocondrial (mtRNA) es un potente estimulador de la vía del interferón tipo I si es liberado al citoplasma. En esta tesis se demuestra que la inhibición de la vía del interferón tipo I se debe a los bajos niveles de mtRNA en condiciones de hipoxia, probablemente debido a una disminución en la transcripción del ADN mitocondrial, ya que no se detectó un aumento en los niveles de enzimas implicadas en la degradación del mtRNA ni tampoco se vio un aumento en la mitofagia, proceso por el cual la célula elimina mitocondrias no funcionales o dañadas en condiciones de hipoxia. Dado que muchos tratamientos oncológicos requieren la total funcionalidad de la vía del interferón tipo I para ser exitosos, y dado el efecto inmunosupresor ejercido por hipoxia, los resultados presentados en esta tesis sugieren que además de contar con el efecto inmunosupresor ya conocido de hipoxia, se debería tener en cuenta también las causas de esta inmunosupresión, como el reciente descubrimiento de la menor transcripción del ADN mitocondrial.

El melanoma cutáneo es un trastorno neoplásico de la piel que se origina por la transformación maligna de los melanocitos de la epidermis. Se trata de un tipo de cáncer muy agresivo con gran capacidad de metastatizar para el que no existen tratamientos eficaces en estadios avanzados, por lo que la categorización de los enfermos diagnosticados en fases tempranas en función de su pronóstico es clave para un mejor abordaje la enfermedad. Las vesículas extracelulares (EV) constituyen un mecanismo de comunicación celular de gran relevancia en la progresión del melanoma y representan un campo de estudio clave para comprender mejor los mecanismos de progresión del cáncer e identificar biomarcadores con valor pronóstico. En esta tesis doctoral a) se caracterizaron mediante LC-MS/MS los perfiles proteómicos de las EV liberadas por líneas celulares de melanocitos y melanoma metastásico en cultivo, b) se evaluó la implicación de una de las proteínas identificadas, CEMIP, en la modulación del microambiente tumoral, demostrando que la exposición de fibroblastos dérmicos a EV tumorales con alta y baja presencia de CEMIP modula su capacidad migratoria de manera CEMIP-dependiente sin llevar asociado un cambio en los niveles de SMA, c) se optimizó el método de aislamiento de EV a partir de muestras de suero y d) se identificó, mediante un estudio proteómico dirigido basado en ensayo de extensión por proximidad (PEA), que niveles más altos de CXCL11, CXCL13, VEGF-A y MMP-7 contenidos en EV séricas se asocian a mal pronóstico en pacientes con melanoma cutáneo en estadio II, lo que sugiere su potencial como biomarcadores en estadios tempranos de la enfermedad.

Grapes and red wine are the main sources of resveratrol, a polyphenol widely known for its beneficial effects on various diseases. However, other parts of the vine (wood, canes and roots) are important and cheap sources of other bioactive stilbenes. The main objective of this thesis was 1) to carry out a preliminary screening of a series of novel stilbenes (including glucosides and oligomers of resveratrol) from Vitis vinifera vine for their cytotoxic and anti¿inflammatory potential, and 2) to select the most potent one to establish its mechanism of action. We tested cytotoxicity in human hepatocarcinoma HepG2 (wild-type p53) and Hep3B (p53-null), and inflammation in the murine macrophage RAW 264.7 cell line. Several glucosides, which had never before been extracted from the woody part of the vine, showed moderate cytotoxic activity. Piceatannol and the oligomers, ¿-viniferin, hopeaphenol and isohopeaphenol, inhibited the inflammatory response decreasing the levels of nitric oxide, reactive oxygen species, and cytokines. Of the oligomers tested, R2¿viniferin (tetramer) was the most potent in inducing cell death in HepG2, not affecting human non¿transformed hepatocyes. R2¿viniferin exerted its toxic action by a p53¿dependent mechanism, that involved DNA damage, increased H2O2, upregulation of mitochondrial SOD, and apoptosis. We conclude that Vitis vinifera cane is a source of R2¿viniferin, a promising natural compound in the development of chemotherapies against p53¿positive human hepatocellular carcinomas. No rebasar en extensión el presente recuadro)

En el siglo XXI, el cáncer se ha convertido en la segunda causa de muerte en todo el mundo. Esta enfermedad es el resultado de un conjunto de mutaciones, provocando que las células crezcan, se dividan y se propaguen sin control, dando lugar a que se desarrolle metástasis. El cáncer colorrectal, (CCR) el cual se puede originar tanto en el colon como en el recto, se encuentra entre los cánceres con mayor mortalidad a nivel mundial. Varias investigaciones han demostrado que en el CCR existen bucles autocrinos, que juegan un papel importante en la iniciación y progresión del cáncer. Los factores de crecimiento están involucrados en esta estimulación autocrina, entre ellos cabe destacar los miembros de la familia del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), aunque al principio se creía que su función solo se limitaba a la permeabilidad vascular y la angiogénesis de manera paracrina. El presente trabajo se ha centrado en el estudio de VEGF-C, ya que se ha demostrado su importante implicación en el microambiente tumoral del CCR. Además, nuestro laboratorio estudia las proteínas convertasas, las cuales son necesarias para para la maduración y activación del VEGFC. Las convertasas concretamente cortan entre el C-terminal silk homology domain (SHD) y el VEGF homology domain (VHD), desprendiendo el fragmento C-terminal. Hasta la fecha, se creía que el fragmento C-terminal liberado durante la escisión pro-VEGF-C no tenía ninguna función, pero hemos dedicado nuestro esfuerzo a dilucidar su papel en el CCR; siendo este el objetivo de la presente tesis. Para ello hemos realizado una serie de experimentos tanto in vitro como in vivo que han demostrado que el fragmento C terminal del VEGFC muestra características protumorales que le presentan como una diana para el CRC.

Tesi honen helburu nagusia bizitzaren amaierako fasean ospitaleratutako paziente geriatrikoetan pertsona ardatz duen preskripzio (PAP) eredu bat aplikatzeak tratamendu farmakologikoaren egokitzapenean duen eragina ebaluatzea da. R. Bermingham Ospitaleko Eriondo Geriatrikoko Unitatean egin zen interbentzio ikerketa prospektiboa, kontrolatua eta ausazkoa da. NECPAL CCOMS-ICO© testaren arabera, baldintza kroniko aurreratuak eta arreta aringarriaren beharra zuten 65 urtetik gorako gaixoak identifikatu eta ikertu ziren. Guztira 114 paziente erregistratu ziren, 57 kontrol taldekoak eta beste horrenbeste interbentzio taldekoak. Bizitzaren amaierako fasean dauden pertsonetan, PAP eredu baten aplikazioak medikamentu kronikoen gutxitzea eta tratamendu farmakologikoen egokitzapena neurtzeko erabiltzen diren irizpide eta aldagaien hobekuntza egiaztatu du. Eredua aplikatzearen eragina egonkor mantendu da ospitaleko alta eman eta ondorengo lehen 3 hilabeteetan, batez ere STOPP Frail irizpide eta farmakoen arteko interakzioetan, ondorioz, medikamentuen iatrogeniari loturiko arriskua murriztu egin ahal izan da. Ospitaleko altaren ondoren, eta denborak aurrera egin ahala, kontsumitutako medikamentu kronikoen batazbesteko kopuruak, karga antikolinergiko eta lasaigarriak eta konplexutasun terapeutikoak okerrera egin dute berriro, emaitza horiek agerian utzi dutelarik asistentzia-maila desberdinen artean zainketen segimenduak izan dezakeen hobekuntza marjinean. PAP ereduari esker, ospitale-alta jaso eta lehen hilabetean larrialdietara egiten diren bisitak murriztu ahal izan dira, nahiz eta efektu honek ezin izan duen denborak aurrera egin ahala iraun. Hori dela eta, ospitale eta lehen mailako arretaren artean lankidetzarako sare berriak sortzeko beharra planteatzen da.

¿Es posible que las ondas eléctricas del cerebro (registradas mediante EEG) y su interacción con las hemodinámicas (registradas mediante PPG) puedan determinar de alguna manera situaciones de dolor progresivo? La sinergia entre la tecnología electrónica y la instrumentación de última generación, junto con la incorporación del análisis estadístico y la ciencia de datos, ofrece enormes posibilidades en la investigación biomédica, y más concretamente, en la neurociencia. La posibilidad de monitorizar on-line sus variaciones en la percepción del dolor térmico utilizando un dispositivo y algoritmos puede ser de interés para estudiar diferentes patologías que afectan al sistema nervioso periférico, como neuropatías de fibras pequeñas, fibromialgia o neuropatía diabética dolorosa. En este estudio, se ha diseñado y desarrollado una plataforma, que por un lado genera un estímulo térmico controlado gracias al aumento o disminución de temperatura de una placa Peltier, llegando a ser "doloroso" y por otro, captura simultáneamente las señales EEG y PPG para posteriormente estudiar los posibles patrones o biomarcadores del dolor a través del análisis estadístico y la ciencia de datos.

Las modificaciones post-traduccionales son mecanismos esenciales para la modulación de respuestas celulares a diversos estímulos. La relevancia de la NEDDilación de proteínas en particular se ha demostrado en distintas enfermedades, incluyendo el cáncer. En este estudio se investigó el papel de la NEDDilación de proteínas en el desarrollo y progresión del colangiocarcinoma (CCA). Para ello, se analizó la expresión de distintos componentes de la vía de NEDDilación (i.e., NAE1, UBA3, NEDD8) en tejido de pacientes con CCA e hígado sano adyacente al tumor, así como en líneas celulares humanas de CCA en comparación a colangiocitos humanos normales (NHC), observando que el incremento de NEDDilación parece ser un evento general en CCA. Por ello, utilizamos Pevonedistat, un inhibidor específico de NEDDilación, sobre las células de CCA, observando una consecuente disminución de la NEDDilación de proteínas, acompañada de una reducción de la proliferación y la supervivencia de dichas células. En modelos murinos subcutáneo y ortotópico de CCA humano, la administración de Pevonedistat resultó en una disminución del crecimiento tumoral. Simultáneamente, tras inmunoprecipitar las proteínas NEDDiladas en células de CCA y NHCs, realizamos un análisis proteómico para identificar aquellas proteínas diferencialmente NEDDiladas en células tumorales. Por otro lado, generamos mediante CRISPR/Cas9 células de CCA deficientes en NAE1, que presentaron una menor capacidad proliferativa in vitro y un crecimiento más lento en tumores subcutáneos in vivo. Además, el secretoma de células deficientes en NAE1 redujo la proliferación y migración de fibroblastos asociados a tumor derivados de pacientes con CCA. En conclusión, la NEDDilación de proteínas se presenta como una nueva diana terapéutica en el tratamiento del CCA y su microambiente tumoral.

Los fibroblastos asociados al cáncer son uno de los componentes mayoritarios del microambiente tumoral. La expresión de uno de sus marcadores, la Proteína de Activación de Fibroblastos ¿ (FAP) recientemente se ha vinculado con un peor pronóstico en diferentes tipos de neoplasias, por ejemplo, el carcinoma renal de células claras. En esta tesis doctoral se estudia la influencia de dicha proteína en el carcinoma colorrectal, una de las neoplasias con mayor incidencia a nivel mundial. Para ello se analiza la expresión inmunohistoquímica de FAP en toda la secuencia evolutiva de la neoplasia (pólipo adenomatoso, tumor primario, metástasis locorregional y metástasis a distancia). Se corrobora su expresión positiva en el tumor infiltrante y se evidencia que, además de expresarse más en el subtipo histológico convencional, ejerce fundamentalmente su influencia carcinogénica en las fases iniciales del proceso a nivel del tumor primario. No se le atribuye, sin embargo, un papel pronóstico influyente en la supervivencia. El estudio de los niveles séricos de la fracción soluble de FAP (FAPs) permite observar que los niveles de la proteína son inferiores en pacientes de carcinoma colorrectal que en sujetos sanos. Es más, a menores valores de concentración sérica el pronóstico de la enfemedad parece ser peor. Se presenta, por tanto, a FAPs como un posible biomarcador en el diagnóstico y seguimiento del carcinoma colorrectal.

Zelulen patroi epigenetikoak haien fisiologia zehazten du, eta organismo baten garapenean zehar zelula bakoitzak duen patroi espezifikoak haren diferentziazioa bideratzen du, organismo osoaren garapen egokia bat koordinatuz. Hala ere, inguruneak eta bizi estiloak eragin kaltegarriak eragin ditzake norbanakoengan, zelulen fisiologia zehazten duen patroi epigenetikoan eraginez. Biomedikuntzak egun duen erronka handienetariko bat inguruneak edota kanpo faktoreek eragindako aldaketa epigenetikoek sortu ditzaketen osasun arazoen edo gaixotasunen atzean dauden mekanismo molekularrak ulertzea da. Bestalde, aldaketa fisiologiko horiek eragiten dituzten marka epigenetikoak denboran zehar mantendu daitezkeela ikusi da. Beraz, kanpo faktore horiekin kontaktu zuzena izan duten bizidunek eragin nabarmenak pairatzeaz gain, denbora zehar mantentzen dituzte memoria zelularra baimentzen duten mekanismoen bidez, eta horrez gain, eragin horien belaunaldiz belaunaldiko herentzia bat ere eman daitekeela ziurtatzen dituzten zantzuak geroz eta ugariagoak dira. Aurrekari horiek kontuan hartuta, doktore-tesi honen helburu nagusia morfinak eragin ditzakeen aldaketa epigenetiko nagusiak identifikatu, eta horiek zelulen edota organismo bizidun konplexuen fisiologian eragin ditzakeen aldaketak aztertzea izan da. Aldaketa fisiologiko horiek eragiten dituzten mekanismo epigenetiko ezberdinak badaude ere, kasu honetan DNAren metilazioan zentratu gara, eta Bigarren Belaunaldiko Sekuentziazio teknikak erabili ditugu metiloma aztertzeko helburuarekin. Ikerketa lan honek, besteak beste, memoria epigenetikoaren atzean dauden mekanismoak aztertzeko aukera eskaini digu. Morfinak asaldurak sortzen ditu birprogramazio epigenetikoan funtsezko prozesua den X kromosomaren inaktibazioan, eta gainera, asaldura horiek mantentzeko eta heredatzeko potentzialtasuna dutenez, morfinak eragindako zelularteko memoriaren azpian dauden mekanismo epigenetikoak ikertu ditugu. Horrez gain, birprogramazioaren helburu nagusia den eta zelula amen bereizgarria den pluripotentzia indartua geratzen dela frogatu dugu morfinaren presentzian, horretarako ezinbestekoak diren zenbait prozesu molekular bultzatuz; transkripzio faktore garrantzitsuen adierazpena doiketa, genomaren estatus epigenetikoa murrizketa, eta X kromosoma egoera aktiboaren mantenua. Horrek, morfinaren erabilpenak zelulen fisiologian izan ditzakeen ondorioetan are gehiago sakontzeko aukera eskaini digu, aurrerapauso interesgarriak gauzatuz enbrioiaren garapen-prozesuaren ezagutzan.

Tesi honek ausazko entsegu kliniko bat barne hartzen du. Helburu nagusia ariketa fisikoan oinarritutako osagai anitzeko ariketa fisikoko bi esku-hartze desberdinen (talde zein bakarkako saioen epeak iraupen desberdinekoak ziren) eraginkortasuna aztertzea da ospitalizazio bat pairatu duten hirugarren adineko pertsonetan. Lehenik horrelako esku hartze bat onartzeko edo ezeztatzeko arrazoiak aurkitzen saiatu ginen. Emaitzek agerian utzi zuten adin handia, nutrizio-egoera txarra eta etxerako irisgarritasun txikiagoa zirela parte-hartzea baztertzeko faktore prediktiboak. Ospitale-altari aplikatutako osagai anitzeko ariketa fisikoko bi esku-hartzeek 12 asteren ondoren funtzio fisiko eta nutrizio-egoeran onura nabarmenak ekarri, eta jarduera fisikoa handitu zuten, eta hurrengo 12 asteetan ondorio positiboei eutsi zieten. Ez zen talde-denbora elkarrekintzarik hauteman. Bestalde, sarkopenian eta hauskortasunean ere 3 hilabeteko esku-hartzearen ondoren ez zen talde-denbora elkarrekintzarik ikusi. Bi taldeek ordea hauskortasun indizea murriztu zuten. Sarkopenia egiaztatua zuten pazienteen ehunekoak bi taldeetan ere hobera egin zuen, baina ez zen eragin esanguratsurik izan. Azkenik ospitaleratu ondoko adineko pertsonetan miostatinaren eta follistatinaren eta hauskortasuna eta/edo sarkopenia arteko lotura alderatzea proposatu genuen. Emaitzek erakutsi zuten ibilera abiadura eta altxa, ibili, bira eta eseri probak hauskortasuna identifikatzeko biomarkatzaileak baino gaitasun handiagoa zutela. Miostatina izan zen berriz sarkopenia identifikatzeko gai zen biomarkatzaile bakarra. Arestian aipatutakoa kontutan hartuta, ondorioztatu dezakegu bi esku-hartzeak eraginkorrak direla hirugarren adineko pazienteentzako. (ez bete tarte hau baino gehiago)

El microambiente tumoral (TME) está compuesto por diferentes tipos celulares, entre los que se incluyen los fibroblastos, adipocitos, células endoteliales e inmunes, que interaccionan entre ellas de forma compleja y que, a menudo, son manipuladas por las células del cáncer en cada paso de la progresión tumoral. Comprender las interacciones entre las células cancerígenas y el microambiente circundante es fundamental para diseñar nuevas estrategias terapéuticas para tratar el cáncer. La inflamación en el TME está altamente asociada con la tumorigénesis, la angiogénesis y la metástasis. Las citoquinas son moduladoras importantes de los procesos inflamatorios y a menudo se encuentran desreguladas en enfermedades como el cáncer. La citoquina oncostatina M (OSM) pertenece a la familia de la interleuquina 6 (IL-6) y se ha demostrado que desempeña un papel relevante en procesos fisiológicos y patológicos como la inflamación, angiogénesis, remodelación ósea y en la progresión tumoral. Este proyecto de Tesis tiene como objetivo determinar el papel del eje de señalización del OSM y su receptor (OSMR) en la progresión del cáncer de mama e investigar su importancia en la modulación del microambiente tumoral. Para abordar este objetivo se ha utilizado una amplia gama de herramientas que incluyen datos clínicos, modelos animales, secuenciación de ARN de célula única (scRNA-seq), citometría de flujo (FACS) y cultivos celulares de líneas de cáncer de mama, fibroblastos asociados al cáncer (CAF) y macrófagos. Nuestros resultados han demostrado que OSM y OSMR se asocian con una peor supervivencia en pacientes de cáncer de mama. Además, la señalización de OSM induce la aparición y progresión del tumor en experimentos de xenoinjertos en ratones. Por el contrario, el silenciamiento de OSMR retrasa la aparición del tumor, disminuye el crecimiento tumoral y la generación de metástasis pulmonares en el modelo genético murino de cáncer de mama MMTV-PYMT. Análisis de muestras de tumores humanos demostraron que OSM y OSMR se encuentran sobre-expresados en el microambiente tumoral. Inyecciones ortotópicas de células murinas (TS1) en ratones deficientes en el gen OSMR revelaron una disminución en el crecimiento tumoral en comparación con los animales control, lo que sugiere que la señalización de OSMR es importante en el estroma tumoral. Los análisis de scRNAseq y FACS de tumores murinos y el análisis bioinformático de muestras clínicas humanas revelaron que las células tumorales y los fibroblastos expresan el receptor OSMR mientras que el ligando OSM se expresa principalmente en el sistema inmune, principalmente en el linaje mieloide presente en el microambiente tumoral, lo que sugiere la existencia de una señalización paracrina entre el microambiente tumoral y las células cancerígenas. Las co-inyecciones de CAFs con líneas celulares de cáncer de mama en ratones inmunodeficientes demostraron que la activación de OSMR en los fibroblastos conduce a un fenotipo más agresivo. Esto respalda la idea de que la señalización por OSMR en el contexto de la progresión tumoral no solo es importante en las células cancerígenas, sino también en los fibroblastos. Además, la señalización por OSM:OSMR en células tumorales y en los CAFs crea un circuito importante de retroalimentación positiva que estimula la liberación de quimioatrayentes responsables de una mayor infiltración de células mieloides en el TME. Por otro lado, las células tumorales activadas por OSM inducen la expresión de OSM en las células mieloides asegurando una producción constante de la citoquina y favoreciendo la progresión tumoral. Los resultados de esta Tesis Doctoral apoyan que la vía de OSM:OSMR actúa como un regulador central de la comunicación entre el compartimento inmunológico, los CAFs y las células tumorales. Esta interacción tiene consecuencias importantes en la iniciación y progresión del tumor y en la modulación del microambiente tumoral. OSMR podría bloquearse mediante la inhibición basada en anticuerpos, estrategia que ha tenido un gran impacto en el cáncer de mama, convirtiéndolo en una diana prometedora para el desarrollo de nuevas estrategias terapéuticas.

El gen KCNH2 o hERG (human ether-a-go-go related gene) codifica las subunidades del canal KV11.1, responsable de la corriente rectificadora tardía rápida de potasio, IKr, en humanos que es fundamental para una correcta repolarización y controla la duración del intervalo QT del electrocardiograma. Una reducción de esta corriente puede causar síndrome de QT largo tipo 2, la cual aumenta la susceptibilidad a padecer arritmias graves como la torsión de puntas. Diversas hormonas como la insulina o la leptina, y factores tróficos como el IGF-1 o la noradrenalina que son necesarios para la correcta expresión de canales de potasio cardiacos también son activadores de la quinasa mTOR (mammalian target of rapamycin). Es por eso que proponemos a mTOR como un posible regulador del canal hERG y usaremos la inhibición de la vía como herramienta para probar su participación en la regulación del canal. Los resultados obtenidos muestran que tal y como pensábamos, la inhibición de mTOR, concretamente del complejo mTORC1, aumentan la corriente hERG mediante un aumento de la traducción y tráfico a membrana de canales hERG. Esto convierte a mTORC1 en una interesante diana a estudiar para tratar patologías como el LQTS2.

Jakina denez, NK (ingelesetik ¿natural killer¿) eta T zelulak interleukinekin estimulatzeak, hala nola hobetu egiten ditu haien funtzio efektiboak, minbiziaren erauzteko estrategia izanik. Tesi honetan nanoformulazio baten (IONP@hIL15HIS) diseinua eta genesia aurkezten dugu, nanomaterial biobateragarri, biodegradagarri eta trakzionagarri batean oinarritua, NK eta T zelulak in vitro aktibatzen dituena, nanopartikularen gainazalean interleukin-15 (IL-15) egoteagatik. In vitro egindako esperimentuetan ikusi da, IL-15 proteina NPren gainazalean inmobilizatzeak onurak ekarri ditzazkeela NK eta T zelulen aktibazioari dagokionez. Horretaz gain, in vivo esperimentazioa ere egin zen emaitzek erakutsi zuten IONP A-hIL15HIS tratatutako saguek tumore hazkuntza geldoaren joera zutela. Oro har, tesi honen emaitzak lehen urrats bat dira IL-15 inmobilizatua NP-n, hau da, IONP@hIL15HIS, minbiziaren tratamendurako tresna terapeutiko berri gisa kontsideratzeko.

El deterioro de la salud relacionado con el envejecimiento afecta más y en mayor medida a las mujeres. Las diferencias en la función sensoriomotriz y neuropsicológica en las personas mayores podrían estar relacionadas con la participación en actividades de la vida diaria, y la promoción de la actividad y ejercicio físico podría ser un recurso atractivo, efectivo y de bajo coste para el mantenimiento de la capacidad funcional en las mujeres mayores. Aunque entre las modalidades de actividad física, caminar es una de las formas más comunes entre la población mayor, debido a su accesibilidad y facilidad, diversos estudios han demostrado que la danza aporta tanto beneficios físicos como neuropsicológicos, entrenando aspectos como la atención, el aprendizaje, la memoria o la movilidad en las personas mayores. Sin embargo, a pesar de que la práctica de danza tradicional vasca esté extendida en el territorio vasco y las mujeres mayores participen en esta actividad, no existen estudios previos sobre su eficiencia en el mantenimiento de la capacidad funcional. En este estudio transversal, llevado a cabo con mujeres mayores comunitarias que viven de forma independiente (n=44, 60-72 años), se han comparado las diferencias en la función sensoriomotriz y neuropsicológica de un grupo de participantes de danza tradicional vasca (GDT) con la de un grupo de mujeres físicamente activas cuya actividad principal era caminar (GFA). Los resultados sugieren que la danza tradicional vasca estimula en mayor medida la función cognitiva-motriz que el caminar en las mujeres mayores con alta funcionalidad. La mejora de estas variables relacionadas con el equilibrio dinámico y la función ejecutiva, indica que la danza en esta población podría ser beneficiosa en mantener o mejorar la capacidad funcional de las actividades que implican la atención

En la piel, y posiblemente en otros tejidos, la identificación de poblaciones celulares ¿stem¿ bajo un excesivo número de denominaciones ha generado confusión en el campo, debido a la reformulación constante de la nomenclatura y a los criterios, muchas veces laxos, por los que se ha considerado una población celular determinada como precursora, y distinta de otras descritas anteriormente. De acuerdo con datos previos del laboratorio respecto a la identidad de las células con potencial neural derivadas de la piel humana (Etxaniz y cols., 2014), los resultados obtenidos en esta Tesis contribuyen a clarificar el campo de las células precursoras aisladas de la piel del ratón, ya que demuestran que las células de Schwann dérmicas son responsables del fenotipo atribuido a las progenitoras neurales descritas en la piel (SKPs). Así mismo, se demuestra que las células de Schwann aisladas en cultivo revierten a un estadio progenitor en un mecanismo de reprogramación dependiente de los niveles de expresión del factor de transcripción Sox2. En relación al origen embrionario de las SKPs de la dermis del tronco, las cuales fueron relacionadas con un origen mesodérmico (trazadas de linaje por Myf5-CreSor y Dermo1-Cre), se demuestra que las células de Schwann dérmicas no pertenecen al linaje celular Myf5+ (presuntamente originadas en el dermomiotomo) y que la activación del promotor Myf5 en el constructo Myf5-CreSor no sucede exclusivamente en linajes celulares derivados del dermomiotomo. El rasgo clínico más característico de la Neurofibromatosis tipo 1 (NF1) es el desarrollo de tumores benignos denominados neurofibromas, en los que predominan las células de Schwann que han inactivado los dos alelos del gen NF1 (NF1-/-). La caracterización de neurofibromas dérmicos procedentes de pacientes con NF1 revela un aumento en la expresión de marcadores de desdiferenciación, propios de células de Schwann activadas en respuesta a daño. Así, de acuerdo con el origen propuesto para este tipo de tumor, este trabajo propone la reprogramación de las células de Schwann como evento inicial en el desarrollo de los neurofibromas dérmicos.

El complejo del poro nuclear está constituido por proteínas denominadas nucleoporinas cuya función era supuestamente restringida al transporte nucleocitoplasmático. Evidencias recientes, sugieren que las nucleoporinas interaccionan estrechamente con la cromatina regulando su disposición espacio temporal y programa de expresión. En este trabajo, se altera la estructura de la cromatina empleando una batería de inhibidores de histonas desacetilasas a fin de inducir una eucromatinización experimental. En este contexto, se observa que varias nucleoporinas, eminentemente aquellas que forman la cesta del complejo del poro, son capaces de relocalizarse al interior nuclear en zonas bien definidas independientemente de sus contrapartes del complejo del poro. Tales acumulaciones están íntimamente relacionadas a células detenidas en la fase G1 del ciclo celular una vez han completado una mitosis exitosa. Adicionalmente, las nucleoporinas descritas en estos agregados son independientes de otros orgánulos nucleares como los nucléolos, las factorías de transcripción, y de replicación; así como de otros fenómenos celulares como los procesos migratorios.

El cáncer y las enfermedades cardiovasculares son en la actualidad las principales causas de mortalidad a nivel mundial. El rápido desarrollo socioeconómico experimentado durante el último siglo ha traído consigo la producción e introducción en el ambiente de millones de sustancias químicas sin suficiente control toxicológico. El incremento experimentado en los últimos años en la incidencia y mortalidad causadas por el cáncer y las enfermedades cardiovasculares no puede ser explicado únicamente por el aumento en el tamaño poblacional, el envejecimiento y factores como la dieta y el estilo de vida. Cada vez existe mayor evidencia de que la exposición a determinados factores ambientales incrementa el riesgo de cáncer y enfermedades cardiovasculares. Entre estos contaminantes ambientales se encuentran los bifenilos policlorados (PCBs). Los PCBs son compuestos químicos fabricados para su comercialización desde el año 1920. Su estabilidad y propiedades propiciaron su uso comercial (en plásticos, pinturas, pesticidas...) y que se distribuyeran a nivel mundial en el medio ambiente. Su amplia distribución, su resistencia a la degradación y su lipofilicidad son las responsables de que hayan entrado en la cadena alimentaria y sigan detectándose en la actualidad en el aire, alimentos e incluso leche materna humana, en niveles que exceden los valores de referencia establecidos por la EFSA. Los PCBs son conocidos actualmente por ser contaminantes orgánicos persistentes y carcinógenos. Sin embargo, aún existe a día de hoy controversia sobre la relación entre la exposición a PCBs y su correlación con el cáncer de mama y el melanoma, y su potencial cardiotóxico durante el desarrollo embrionario apenas ha sido estudiado. Por ello, se decidió estudiar el efecto de una mezcla representativa de la contaminación ambiental por PCBs (Aroclor 1254) sobre el potencial invasivo de líneas tumorales humanas y sobre las propiedades cinemáticas y dinámicas de cardiomiocitos derivados de células ES mediante diferenciación in vitro. Los resultados obtenidos revelan que la exposición al Aroclor 1254 incrementa sobremanera la capacidad invasiva y migratoria de las líneas tumorales de cáncer de mama (MCF-7/AZ y MCF-7/6) y melanoma (HT-144 y A375) estudiadas. Para ello, la mezcla de PCBs induce la secreción de MMPs (MMP2 y MMP9), favorece la transición epitelio-mesénquima y altera además las dinámicas celulares a través de la activación de la señalización de RhoA. La inhibición de ROCK es capaz de revertir completamente el efecto proinvasivo inducido por los PCBs. La exposición a PCBs durante la cardiomiogénesis temprana altera la frecuencia cardíaca, las propiedades contráctiles y la organización estructural del sincitio latiente. Nuestros resultados muestran que los PCBs son importantes agentes etiológicos en el cáncer de mama y el melanoma, así como en el futuro desarrollo de enfermedades cardiovasculares. Esta tesis aporta un mayor conocimiento del riesgo actual que supone la exposición a PCBs y pone de manifiesto la necesidad de un mayor estudio del riesgo que supone la exposición a contaminantes ambientales en la salud humana.

El objetivo de esta tesis doctoral fue el de encontrar nuevos biomarcadores para el melanoma, ya que la supervivencia de los pacientes se reduce dramáticamente cuando no se detecta en la fase temprana de la enfermedad. Para esto, se ha estudiado y comparado el contenido lipídico de numerosas líneas celulares de melanocitos de piel sanos, melanocitos extraidos de nevus, melanoma primarios y melanoma metastásico, aplicando diferentes metodologías de análisis lipidómico. Los resultados demuestran que las células sanas y tumorales presenta una huella lipídica diferencial. Además, aplicando diferentes análisis estadísticos, hemos detectado numerosas especies de lípidos que presentan una alteración en su intensidad al comparar los diferentes grupos de estudio. Todas estas especies lipídicas se han definido como potenciales biomarcadores, y la metodología de detectarlos va a ser próximamente patentada. Por otro lado, hemos comprobado que algunas de las enzimas que catabolizan algunos de los lípidos con expresión diferencial en melanoma tienen su expresión y actividad alteradas. En concreto, hemos comprobado que la fosfolipasa D2 ayuda en el proceso tumoral y metastásico del melanoma.

The generation of a cartilage tissue engineering (TE) construct is currently a viable strategy for the treatment of osteoarthritis. Such construct requires a biomaterial with optimal properties, including biocompatibility, biodegradability and porosity, among others. Natural polymers like, CH and CS are attractive building block for the development of biomaterials for TE applications. We investigated the role of the incorporation of chitin nanoforms (i.e., nanocrystals or nanofibers) into Genipin-chitosan crosslinked (GCS) matrices designed in two different shapes, 2D films and 3D porous scaffolds. The aim was to assess the potential of these biomaterials as support for L-929 murine fibroblast cell line and human adipose-derived stem cells (hASCs) growth. The incorporation of chitin nanocrystals or nanofibers on the GCS 2D films and 3D porous scaffolds displayed better swelling properties and enhanced the mechanical performance when compared to nanoform-free GCS materials. Furthermore, our data showed that these biomaterials provide topological cues to support hASCs growth. The incorporation of low concentration of chitin nanoforms, in particular, was found to be the most appropriate supports for the proliferation and adhesion of hASCs. As cell source, hASCs have shown potential for cartilage regeneration when cultured in the appropriate conditions. Moreover, it has been suggested that physiological low oxygen (hypoxia) can significantly improve hASCs adhesion, proliferation and chondrogenic differentiation while preventing their osteogenic differentiation. We first investigated the chondrogenic potential of the hASCs spheroids and demonstrated that were positive to cartilage-specific markers including collagen type II (COL2A1) and aggrecan (ACAN), while lacked expression in the osteogenic differentiation marker collagen type I (COL1A2). Moreover, hypoxia inducible factor 1¿, which positively directs COL2A1 and ACAN expression, was upregulated in chondrospheroids cultured under hypoxia. Finally, this 3D culture hypoxic system created a pro-chondrogenic environment that allowed hASCs to differentiate into the chitosan/chitin nanocrystals 3D porous scaffold producing a chondral extracellular matrix with a high sulphated glucosaminoglycan content, which is characteristic of articular cartilage. This 3D chondrogenic differentiation model mimics the in vivo cartilage environment during the embryonic development, which entails a further step in cartilage TE, having potential application for articular cartilage regeneration.

Eiakulatu berri diren giza espermatozoideak heldugabeak dira eta ugalkortasun ahalmena lortzeko emakumezkoaren ugaltze-traktuan zenbat aldaketa biokimiko eta fisiologiko pairatu behar dituzte. Sekuentzialki, espermatozoideek mugitzeko ahalmena, kapazitazioa, hiperaktibazioa eta erreakzio akrosomikoa bezalako prozesuak aurrera eraman behar dituzte obozito bat ernaldu ahal izateko. Jakina denez, gameto arrek espermatozoide-espezifikoak diren proteinak adierazten dituzte, proteoma guztiaren %30a osatzen dutelarik. Hori dela eta, giza espermatozoideen emankortasuna espermatozoide-espezifikoak diren mekanismo molekularren bidez erregula liteke. Ezaguna denez, mekanismo ionotropikoek giza espermatozoideen emankortasuna erregulatzen dute kanale ionikoen eta erantzun azkarren bitartez. Hala ere, gaur egun, giza espermatozoideen gainazalean adierazten diren G-proteinetara loturiko hartzaileek (GPCR) emankortasunaren erregulazioan eginkizun garrantzitsua izan lezaketela uste da. Behin estimulua jasota GPCR hartzaileek G proteinen bidez seinaliztapen bidezidor intrazelular desberdinak pizten dituzte erantzun zelular espezifikoetan bukatu arte. Hartzaile hauek prozesu fisiologiko anitzetan parte hartzen dute eta gaur egun, industria farmakologikoan itu terapeutiko garrantzitsuak kontsideratzen dira. Giza espermatozoideetan, ordea, GPCR hartzaileen azpitik induzitzen diren seinaliztapen bidezidorrak aski ezezagunak dira. Hartzaile opioideak ikerketa eredu bezala erabiliz, azterketa fosfoproteomiko eta funtzionalek erakutsi dute giza espermatozoideek mekanismo molekular espezifiko eta bakarrak aurkezten dituztela GPCR hartzaileen azpitik. Bereziki, hartzaile opioideek giza espermatozoideen ahalmen ugalkorra erregulatzen dute kaltzio kanaleak modulatuz eta fosforilazio aldaketak sortuz espermatozoideek soilik adierazten dituzten proteina espezifikoetan. Beste alde batetik, SPANX-A/D proteina familia espermatozoide-espezifikoa den proteomaren parte da eta emankortasunean betetzen duen funtzioa oraindik ez da argitu. Bereziki, ingelesezko ¿Cancer Testis Antigen¿ (CTA) taldearen barruan sartzen da, izan ere, bere adierazpena espermatozoideetara mugaturik egoteaz gain zenbait minbizietan ere agertu egiten da. Hori dela eta, SPANX-A/D proteina familiak giza espermatozoideetan betetzen duen funtzio fisiologikoa baliogarria litzateke minbizian duen funtzio fisiopatologikoa ulertzeko. Biologia molekularra aztergai duten teknikak eta azterketa funtzionalak erabilita, SPANX-A/D proteina familiaren karakterizazio funtzional fisiologikoa eta fisiopatologikoa egin ziren. Horien arabera, SPANX-A/D proteina familia funtzio nuklearraren erregulazioan dihardu giza espermatozoideetan eta melanoman. Ondorengo doktore tesitik eratorritako emaitzek beraz, espermatozoide-espezifikoak diren proteinei eta horien mekanismo molekularrei buruzko informazio baliogarriaz hornitzen digute. Ezagutza hori gizonezkoaren antzutasuna zein azaleko minbizia tratatzeko itu terapeutikoen garapenerako erabilgarria izateaz gain, antisorgailuen eta tumoreetara zuzenduriko droga farmakologikoen sorkuntzan ezinbestekoa litzateke etorkizunean.

Epigenetikak, kanpo faktoreek edo inguruneak norbanakoan izan dezaketen eragina aztertzen du. Azken urteetan, zenbait ikerketek erakutsi dutenez, inguruneak eragin zuzena izan dezake norbanako helduaren ezaugarri fisiologikoetan. Hala ere, kanpo faktoreek umekian eta garapen goiztiarrean izan dezaketen eraginari buruz, ezer gutxi deskribatu da. Geneen adierazpenarekin duten elkarteratzea dela eta, histonen aldaketak informazio epigenetikoaren eragile nagusien artean aurkitzen ditugu, eta memoria epigenetikoan paper garrantzitsua izan dezaketela iradoki da. Hala ere, naiz eta histonen aldaketa espezifikoek transkripzio egoerekin erlazioa duten, epe luzean zehar mantendu daitekeen herentziaren mekanismoa ez da oraindik ere argitu. Hau guztia aztertzeko eta kanpo estimulu eredu bezala morfina erabiliz, bigarren belaunaldiko sekuentziazio teknikak erabili dira kromatina eta transkriptomika analisiak burutzeko. Bertatik H3K27me3 marka epigenetiko errepresiogilearen desdoitze orokor bat hauteman dugu, epe luzeko geneen adierazpen aldaketak sortuz, saguen ama zelula enbrionikoetan. Zehazki morfinaren tratamendu kronikoak eragindako efektua CpG irletan ugariak diren sustatzaileetan, inpronta genomikodun geneen metilazioaren erregulazio eremuetan, lncRNA-etan eta elementu errepikakorretan aurkitu ditugu. Aipatzekoa da, H3K27me3-ren eta bere erregulazio konplexuaren (Polycomb repressive complex 2 edo PRC2), auto erregulazio mekanismo bat identifikatu dugula morfinaren presentzian. Horrez gain, morfinak eragindako H3K27me3-ko aldaketek bi gene espezifikotan sortzen dituen adierazpen aldaketak sakonago aztertu ditugu, Bmp4 eta Smchd1 hurrenez hurren, hauek parte hartzen duten prozesuak guztiz eraldatzen direla aurkituz. Bmp4 enbrioi goiztiarren garapenean eta jatorrizko hozi zelulen sorreran parte hartzen duen hazkuntza faktorea da eta morfinaren ondorioz, bi prozesu horien azkartzea eragiten dela hauteman dugu. Bestalde, Smchd1, X kromosomaren inaktibazioaren mantentze lanetan haritzen da eta gure sisteman morfinaren eraginez erreprimituta aurkitu dugu X kromosomaren birraktibazioa azkartuz. Doktoretza tesi honetan lortutako emaitza hauek, kanpo faktoreek sortutako zelulen arteko memoria epigenetikoaren mekanismo molekularrei buruzko informazio baliagarriaz hornitzen gaituzte, belaunaldiz belaunaldiko oinordekotza epigenetikoa ulertzeko oinarri gisa. Hori dela eta, ezagutza hori heredatu daitezkeen aldaketa epigenetikoen identifikaziorako baliagarria litzateke etorkizunean.

The aim of this thesis is to humbly explore the application of diverse methodologies and theories coming from Computer Sciences, Mathematics and Physics in the field of neurosciences, with an special focus on neurodegenerative diseases. In this thesis brain network analysis was used to unveil functional and structural patterns in both pathological and healthy brains. We explore in a different manner various aspects related with the epilepsy, AD and healthy aging.

Melanoma is an extremely lethal skin cancer that arises as a result of the malignant transformation of melanocytes. The incidence of this pathology worldwide has increased in the last 30 years in greater proportion than the rest of the cancer, between 4-6% yearly, and shows substantial disparities between populations. To ensure appropriate treatment and a successful outcome, a timely and accurate diagnosis and prognosis of malignant melanoma is essential. Because of this, molecular alterations in the pathogenesis of melanoma are the subject of more active research. In terms of histology, melanoma show a wide variety of characteristics including epithelial, hematological, mesenchymal, and neural features, which can often make the diagnosis of the disease challenging. As new biomarkers candidates, in this thesis we examined the expression of RKIP (Raf Kinase Inhibitor Protein) and Pirin. RKIP has been extensively reported as an inhibitor of key signaling pathways involved in the aggressive tumor phenotype and shows decreased expression in several types of cancer, and Pirin originally was considered to act as a transcriptional co-factor, but it has recently been reported to play a role in tumorigenesis and the malignant progression of many tumors. However, these studies were performed with a small cohort of patients, so a larger study is required for further evaluation of this marker's diagnostic or prognostic value. In this context, this doctoral thesis¿ goals were to evaluate the potential value of RKIP and Pirin as melanoma markers and their implication on melanocytic cell biology. Regarding RKIP, immunohistochemistry analysis revealed a significantly higher expression of RKIP in nevi compared with early-stage (stage I-II, AJCC 8th) melanoma biopsies. Proliferation, wound healing, and collagen-coated transwell assays uncovered the implication of RKIP on the motility but not on the proliferative capacity of melanoma cells as RKIP protein levels were inversely correlated with the migration capacity of both primary and metastatic melanoma cells but did not alter other parameters. As shown by RNA sequencing, endogenous RKIP knockdown in primary melanocytes triggered the deregulation of cellular differentiation-related processes, including genes (i.e., ZEB1, THY-1) closely related to the EMT. Interestingly, NANOG was identified as a putative transcriptional regulator of many of the deregulated genes, and RKIP was able to decrease the activation of the NANOG promoter. In relation to Pirin, the immunohistochemistry multivariate analysis revealed that early melanoma with stronger Pirin expression were more than twice as likely to develop metastases during the follow-up. On the other hand, transcriptome analysis of PIR downregulated melanocytes showed a dampening of genes involved in the G1/S transition, cell proliferation, and cell migration. In addition, an in silico approach predicted that JARID1B as a potential transcriptional regulator that lies between PIR and its downstream modulated genes, which was corroborated by co-transfection experiments and functional analysis. To summarize, the results obtained in this thesis support the diagnostic utility of RKIP staining due to the significantly lower RKIP protein levels in melanoma samples, even at early stages (I¿II) of the disease, and the use of Pirin staining along with the Breslow index as a prognostic marker at early stages (I-II) of melanoma. Moreover, we propose that RKIP could play a role in the maintenance of the differentiation state by negatively regulating NANOG gene expression and, that Pirin could play an important role in modulating the proliferative state of melanoma cells by regulating JARID1B gene expression.

Giltzurrun-zelulen kartzinoma (RCC) organo honetako tubuluetako zelula epitelialetatik eratorritako minbizien taldea da. Munduko osasun erakundearen minbizi urologikoen sailkapenaren arabera, 15 RCC azpimota histologiko baino gehiago daude. Halere, intzidentzia altuena daukaten 3 azpimotek, ¿zelula argien giltzurrun-zelulen kartzinomak¿ (CCRCC), ¿giltzurrun-zelulen kartzinoma papilarrak¿ (PRCC) eta ¿giltzurrun-zelulen kartzinoma kromofoboak¿ (ChRCC) kasuen %90etik gora batzen dituzte. Lan honetan, hiru hauetaz gain, giltzurruneko onkozitoma (RO) ere aztertzen da, RCC onbera ohikoena. Gaur egun, diagnostikatzen diren minbizien %2,4 mota honetakoak dira eta minbiziak eragindako heriotzen %1,7ren erantzule dira. Bi aldiz ohikoagoa da gizonezkoetan emakumezkoetan baino eta intzidentzia nabarmen handiagoa da herrialde garatuetan. Hematuria, saihets-aldeko mina eta masa abdominalen agerpena dira bere sintoma klasikoak baina egun, eritasunaren fase berantiarren erakusle dira. Hala, gaixotasun asintomatikoa da fase goiztiarretan eta ondorioz, zoriz diagnostikatzen dira kasuen erdia baino gehiago, irudi teknikei esker. RCCdun gaixoen pronostikoa faktore ezberdinek baldintzatzen dute. 5 urteko biziraupena %90etik gorakoa da giltzurrunaren baitan lokalizaturiko tumoreetan baina nabarmen jaisten da inbasio maila altuagoa den estadioetan. RCC lokalizatuaren tratamendu estandarra nefrektomia da, hau da, giltzurrunaren erauzketa kirurgikoa. Tratamendu honek tumorearen ezabaketa eragin arren, gaixoen %30ak metastasiak garatzen dituzte. Fase metastasikoetan, terapia gidatuen erabilera gailendu da, tirosina-kinasa hartzaileen eta mTOR seinalizazio bidearen inhibitzaileak lehen eta bigarren lerroko terapia gisa erabiltzen direlarik. Tratamendu hauek aldi batez gaixotasunaren kontrola ahalbideratu arren, tumoreek hauekiko erresistentzia garatzen dute. Ondorioz, RCC gaixoen maneiurako beharrezkoak dira arrisku handiko gaixoen eta tratamendu egokiaren aukeraketarako biomarkatzaileen garapena eta tratamenduaren optimizaziorako terapia berrien diseinua. Tesi proiektu hau kokatzen den ikerketa taldean, peptidasek minbizi mota ezberdinen garapenean betetzen duten funtzioa sakonki aztertu da. Peptidasak lotura peptidikoak hidrolisatzen dituzten entzima multifuntzionalak dira, eta zelulen mintzari atxikita zein hauen barne edo kanpo inguruneetan aurki daitezke. Minbizian, bereziki inbasio eta migrazioarekin erlazionatu badira ere, etapa guztietan parte hartzen dute. Lan honetan, hainbat peptidasek giltzurrun-zelulen kartzinomaren garapenean biomarkatzaile eta diana terapeutiko gisa izan dezaketen potentziala aztertzen da. Batetik, errenina-angiotentsina sistema aztertzen da, angiotentsina peptidoak eraldatzeko gaitasuna daukaten entzimen (NEP/CD10, APA, ACE2 eta ACE) analisitik abiatuta. Bestetik, Fibroblast Activation Protein ¿ (FAP¿) ikertzen da, minbiziari atxikitako fibroblastoen aktibazioan mugarri den serina peptidasa. Errenina-angiotentsina sistema (RAS), presio arteriala eta elektrolito eta fluidoen homeostasia erregulatzen duen sistema endokrino zirkulatorio gisa da ezaguna. Halere, ehun ezberdinetan RAS lokalak deskribatu dira, non zelulen hazkuntza, diferentziazioa eta apoptosia erregulatzen duten. Gainera, sistema honen asaldurak eritasun proliferatiboekin erlazionatu dira, tartean minbiziarekin. Lan honetan, RCCko azpimota histologiko ezberdinetan RASko peptidasen espresioa asaldatuta dagoela frogatzen dugu. Are gehiago, CCRCCan, entzima hauen adierazpenak ezaugarri kliniko-patologiko ezberdinekin korrelazionatu zuen. Hala, ACEren espresioa, angiotentsina II sistemako peptido bioaktiboaren ekoizle nagusia, igo egiten zen gradu histologikoarekin. Aldiz, APArena, angiotentsina II/angiotentsina III bihurtzearen erantzulearena, jaitsi. Honek, angiotentsina II peptido kontzentrazioaren igoera iradokitzen du, eta AT2R hartzailearen jaitsierarekin batera, ACE/Ang II/AT1R ardatzaren bidezko seinalizazioa indartzen du, APA/Ang III/AT2R ardatzarena ahultzearekin batera. Ondorioz, asaldurek aurreneko ardatzari atxikitako tumorearen aldeko efektua areagotzea iradokitzen dute, APA/Ang III/AT2R ardatzari tumorearen aurkako rola emanez. Gainera APAren espresio galerak, RCC gaixoen biziraupen okerragoarekin korrelazionatzen du, ideia hau indartuz. Bestalde, NEP/CD10 eta ACE2 entzimak espresatzen dituzten tumoreen kopurua igo egiten da gradua eta estadioa igo ahala. Hauek, Angiotentsina 1-7 peptidoaren ekoizle nagusiak dira, zein berriki, migrazio eta inbasioarekin erlazionatu den RCCan. Gainera, NEP/CD10en adierazpena, biziraupen okerragoarekin erlazionatzen da. Orokorrean, RCCan errenina-angiotentsina sistema asaldatuta ageri da eta litekeena da bere osagaien espresio aldaketek, abantaila bat suposatzea minbiziaren garapenean. Halaber, RASk RCCan dauzkan asaldurak gaixoen odolean islatzen diren aztertzeko, peptidasen aktibitate serikoa neurtu zen. Hala, NEP/CD10, ACE2 eta APA entzimen aktibitatea altuagoa zen RCC gaixoetan kontroletan baino. Aldiz, CCRCCan ACEren aktibitate serikoa jaitsi egiten zen gradu altuko tumoredun gaixoetan eta metastasidunetan. Era berean, NEP/CD10 eta ACE2ren aktibitateak aldatu egiten ziren klinikan pronostikorako erabiltzen diren UISS eta SSIGN modeloetako taldeetan sailkatzean. Bien aktibitatea baxuagoa zen gaixotasunaren garapena jasateko arrisku altuagoa zeukaten taldeetan. Hala, ehunean eta serumean jasotako emaitzek aurkako joera erakutsi zuten. Ehunean NEP/CD10, ACE2 eta ACEren espresioak gora egiten zuen tumoreen agresibitatea igo ahala, eta aktibitate serikoa aldiz jaitsi egiten zen. Oro har, emaitza hauek RASaren entzimen aktibitate eta espresio aldaketek esangura klinikoa daukatela iradokitzen dute eta ondorioz tresna baliagarriak izan daitezke RCCren diagnostiko, pronostiko edo tratamenduen itu bezala. Fibroblastoen Aktibazio Proteina ¿ edo FAP¿, ia esklusiboki minbiziari atxikitako fibroblastoen (CAF) mintzean espresatzen den proteina da. Bere espresioa tumore epitelialen %90ean deskribatu da eta orokorrean, pronostiko txarreko markatzailea da. Tesi proiektu honetan aurrenekoz deskribatzen da serina peptidasa honen adierazpena RCCan, non pronostikorako erabiltzen diren ezaugarri kliniko- patologikoekin korrelazionatu zuen, hala nola, gradua, inbasio lokala eta diametroarekin. Gainera aldagai hauek bezainbesteko potentziala erakutsi zuen biziraupen okerreneko gaixoak hautatzeko. Tumoreen agresibitatearekin erakutsitako erlazio estuaren ondorioz, FAP¿- ren espresioaren ikerketa metastasidun CCRCC (mCCRCC) gaixoen tumore primarioko zein metastasietako ehunera hedatu zen. mCCRCCan ere, tumore primarioko FAP¿-ren adierazpena biziraupen okerragoarekin erlazionatu zen baina ez ordea ehun metastasikokoa. Gainera, korrelazio positibo bat atzeman zen ehun primarioko eta hauen metastasietako espresioaren artean. Are gehiago, FAP¿-ren adierazpenak, ehun primarioan zein metastasikoan, RCCko tumoreen pronostiko gaiztoko hainbat ezaugarrirekin bat egin zuen, hala nola estadio altuekin, nekrosiarekin, aldaera sarkomatoidearekin, metastasi sinkronikoekin eta bereziki gongoil linfatikoetako metastasiarekin. Emaitza hauek FAP¿-k metastasien garapenean rol garrantzitsua joka lezakela iradokitzen dute. Prozesu horretan erabilitako mekanismo potentzialen ikerketarako, FAP¿-k markatzaile mesenkimalekin daukan erlazioa aztertu zen. Hala, korrelazio positiboa ikusi zen FAP¿ eta bimentinaren espresioaren artean, bai ehun primarioan zein metastasikoan. Edonola honek ez du ziurtatzen FAP¿-k Epitelio- Mesenkima Trantsizioa (EMT) gidatzen duenik. Izan ere, bimentinak, CAFek gidatutako inbasio kolektiboan parte hartzen dutela frogatu da. Inbasio mekanismo honetan, CAFek eta tumore-zelulek batera migratzen dute agregatuak eratuz. Litekeena da FAP¿ inbasio mota honetan inplikatuta egotea baina beharrezkoa da norabide honetan sakontzea serina proteasa honek RCCan daukan rola baieztatzeko. Ondorioz, emaitza hauek FAP¿-k giltzurrun-zelulen kartzinomaren pronostikorako tresna potentziala izan daitekela frogatzen dute. Baina ez hori bakarrik, FAP¿-ren espresio patroi bereizgarriak, metastasien garapenarekin daukan erlazioak eta ehun primario eta metastasikoetan erakutsitako korrelazioak, terapia gidatuen diseinurako itu erakargarri bihurtzen dute.

We studied the human Dental Pulp Stem Cells (hDPSCs) adherence, proliferation, viability and osteo-differentiation potential when cultured on widely used Ti6AL4V titanium surface and a new biomimetic porous surface (BASTM), in the presence or absence of osteoblastic differentiation media supplemented with plasma rich in growth factors (PRGF) and platelet rich fibrin (PRF). Once we studied the effects of these two titanium surfaces on hDPSCs, we performed a comparative study of viability, proliferation and osteoblastic differentiation potential between the most promising mesenchymal stem cells for bone regeneration therapies, hDPSCs and hBMSCs. Lastly, another problem in dental implantology is the loss of periodontal ligament. The function of this tissue is to act like a cushion to absorb part of the masticatory mechanical forces to protect the alveolar bone. Nowadays, the periodontal regenerative therapy is based on the use of barrier membranes in alveolar ridge defects to enhance the bone growth on the surrounding affected area before the placement of dental implants. For this purpose, we studied the porcine decellularized adipose tissue (pDAT).

Ezaguna da hortz muin helduak zelula ama populazio garrantzitsu bat duela barnean, hauei, hortz muineko zelula amak deritze (ingelesez, dental pulp stem cells, DPSCs). Oinarrizko egoeran aurkezten dituzten zelula neuralen markatzaileak, zelula ama neuralek baino irisgarritasun handiagoa, jatorrizko organoaz kanpo hedatzeko ahalmena eta neurodesberdintzapen ahalmenak, bakarrak bilakatzen dituzte giza DPSCs-ak (gDPSCs-ak) gorputz helduan aurkitu daitezkeen beste zelulekiko. Izan ere, birsorkuntza neuraleko terapia zelular autologoetan erabilgarriak izan daitezke. Normalean erabiltzen diren hazkuntza eta mantentze medioek behi serum fetala (BFS) dute konposatu garrantzitsuena bezala, zeinek gDPSCs-en hazkuntza azkarra eta azalerako geruza bakar itxurako hazkuntza zelularra eragiten duen. Era berean, BFS-aren presentziak alergiak, zein erreakzio immunearen aktibazioa eragin ditzakela deskribatua dago in vivo, konposatu honen erabilera tratamendu klinikoetatik baztertzea ezinbestekoa delarik. BFS-ak sor ditzakeen arazo medikotik at erabilgarritasun arazoak ere sor ditzake, izan ere, serumaren presentzian gDPSCs-ak leinu mesenkimaletara bideratzen direla, eta beraz, potentzial neurogenikoa galera dagoela aztertu dute zenbait autorek literaturan. BFS-aren erabilerak dakartzan eragozpen guztiek ezinbestekoa egiten dute serum gabeko eragile neurogeniko berritzaileen diseinua eta hobekuntza. Hurrengo lanean, serum gabeko hazkuntza mediotan ereindako zelulen ezaugarriak ezagutzea izan da gure xedea. Lortutako emaitzek inolako aldaketa genetiko edo epigenetikorik jasan izan ez duten gDPSCs-ak, zelula ama neuralek (ingelesez, neural stem cells, NSCs) sortzen dituzten neuro-esfera egituren antzeko hortz-esferak sortzeko duten ahalmena berretsi zuten. Hortaz aparte, bai serum gabeko zein serum-dun hazkuntza mediotan hazitako gDPSCs-ek zelula ama mesenkimal izaera eta ezaugarri pluripotentzialak mantentzeko gai zirela frogatu genuen. Hala ere, erabili genituen serum gabeko hazkuntza ingurune espezifikoek ezaugarri desberdinak erantsi zizkien gDPSCs-ei. gDPSCs-ak Neurocult¿ desberdintzapen neurogeniko medioan, NSCs-ak egunerokotasunez desberdintzeko erabiltzen den serum gabeko hazkuntza medioa, izan zirenean haziak, hauek glia eta neurona markatzaile helduak adierazteko gaitasuna zutela ikusi genuen. Honetaz aparte, markatzaile ama mesenkimal eta neural goiztiarrak adierazten dituzten genetikoki aldatu bariko gDPSCs-ez gain, CD31, markatzaile endoteliala, adierazten zuten gDPSCs-ak deskribatzen lehenak izan gara serum gabeko hazkuntza ingurunea erabiliz. Kasu honetan, Neurocult¿ hedapenerako medioa erabili genuen. Gainera, timo-gabeko xagu biluzietan garezur barneko gDPSCs-en txertaketa eta hilabete baten ostera, CD31+, Nestina + zelulak burmuineko odol-hodien zelula endotelialekin batera elkarbizitzen eta hauen laminina adierazpena areagotzen aurkitu ziren. Bestalde, gDPSC-ak StemPro MSCTM (STP) izeneko, zelula ama mesenkimalentzako hazkuntza ingurune komertzialean haziak izan zirenen. Era berean, STP-k zelulei eskainitako aldaketa molekular eta fisiologikoak erabiliz, markatzaile pluripotentzialen eta gandor neuralen (GN) markatzaileen handipen bat antzeman genuen gDPSCs-ek aurkeztutako ahalmen neurogenikoaren igotzearekin batera. Honek guztiak, gandor neuraleko ama zeluletarantz (ingelesez, neural crest stem cells, NCSCs), hau da leinu primitibo baterantz atzera pausu bat iradokitzen du. Gure emaitzek, serum gabeko erabilera gDPSC-ak hazteko egokia dela adierazten dute. Ez ziren bakarrik serum-aren erabilerarekin erlazionatutako arazoak ekidin, baizik eta leinu neuraletara asko erraztu dezakeen gandor neuraleko ama izaeraren agerpena lortu zen. Neurodesberdintzapenetik harago, serum gabeko eragileak erabiliz gDPSCs-tatik eratorritako zelula endotelial funtzionalak, burmuinean integratzeko eta odol hodiak sortzeko gaitasuna erakutsi zuten, lortzen lehen taldea izan gara . Laburbilduz, gDPSCs-en zelulen bideragarritasunarekin, ¿amatasun¿-arekin, ahalmen neurogenikoarekin zein sistema biziekin izan dezaketen elkarrekintzekin zerikusia duten serum gabeko zelula hazkuntzek sor ditzaketen zalantzak argituak izan dira. Gorago aipatutako ezaugarriekin batera gDPSCs-ek erakutsitako gaitasun neurogeniko eta berriki aztertutako zelula endotelialetara desberdintzeko ahalmenak ikusita, gDPSCs-ak nerbio-ehun birsortze terapietan erabiltzeko gizaki helduetan aurki daitezkeen zelula ama aproposenak direla ondorioztatu daiteke.

ABSTRACT Despite the last progress made on biomedical field during the last years, colorectal cancer (CRC) is still the third most frequent cancer in men and the second in women worldwide according to the WHO (World Health Organization). Moreover, its high incidence makes it one of the main causes of cancer-related deaths. Renin Angiotensin System (RAS) is a peptide system classically related to the regulation of blood pressure and hydroelectrolitic balance. Recent studies have demonstrated that beyond the classical functions, RAS is also involved in processes related to cancer progression. However, the high complexity of the system impedes the full understanding of it specific role in those processes. In fact, there are components, such as (pro)renin receptor (PRR), of which very little is known. The investigation on the functions of the newly discovered components might contribute to the full understanding of the role of RAS in cancer. Even if there are very few works that study the role of PRR in cancer, some preliminary results suggest an important role of PRR in cancer. However, such lack of studies makes its comprehension still superficial. The aim of this Doctoral Thesis is the study of PRR in colorectal cancer from descriptive and functional points of views. To that end, immunohistochemical techniques as well as cell and molecular biology techniques have been employed. The results of the descriptive study point PRR as a key component in the initiation of CRC, since its protein expression augments gradually along the polyp-cancer sequence. Moreover, it could be considered a potential biomarker of CRC progression in the intestinal-type histologic subtype (the most frequent one). In fact, PRR is able to predict the aggressiveness of CRC according to the stage, as well as patients¿ overall survival. Furthermore, this effect seems to be due to its apparent tight association with the metastatic occurrence. The functional studies, on the other hand, suggest PRR as an essential component for the acquisition of the hallmarks of cancer that colonic cell must gain to develop a cancer. Moreover, we have identified possible microRNAs that might be involved in the regulation of PRR protein expression. Finally, even if we were not able to detect angiotensin peptides in sera of patients with CRC, we have realised that C3f complement fragment and prothrombin could be candidate biomarkers able to discriminate between healthy controls and CRC patients with and without metastasis. To sum up, PRR seems to be deeply involved in CRC initiation and progression and this finding may provide us with possible future CRC biomarkers as well as potential drug targets that may help in the improvement of CRC diagnosis, prognosis and treatment. LABURPENA Azken urteotan eremu biomedikoan aurrerapenak eman badira ere, heste lodiko minbizia (CRC) egun mundu mailan hirugarren ohikoena da gizonezkoetan eta bigarrena emakumezkoetan WHO (World Health Organization)-aren arabera. Gainera, intzidentzia hain altua izanda, mundu mailan minbizi guztien artean CRC hirugarren heriotza-kausa da sexu biak batera hartuta (WHO). Errenina Angiotentsina Sistema (RAS) tentsio arteriala eta balantze hidroelektrolitikoaren erregulazioan parte hartzen duen sistema peptidikoa da. Azken aldiko ikerketek, RASak funtzio kasikoetaz gain minbiziaren garapenari loturiko funtzioak ere betetzen dituela frogatu dute. Hala ere, sistemaren konplexutasun handiak RASak minbizian daukan paper espezifikoaren ulermena eragotzi egiten du. Izan ere, azken urteotan sistemaren osagai berriak aurkitu dira, (pro)errenina hartzailea (PRR) kasu, eta hauen papera oraindik sakonki ikertu gabe dirau. Hauen azterketa sakonak, ondorioz, RASaren zereginen ulermenean lagun lezake. Lan gutxi badaude ere, emaitz preliminarrek PRRak zeregin inportantea izan dezakela iradoki dute, baina oraindik ikerketa lan sakonagoak beharrezkoak dira. Doktore Tesi honen helburua, PRRak heste lodiko minbizian daukan papera ikertzea da ikuspuntu deskriptibo zein funtzionaletik. Horretarako, teknika immunohistokimikoak eta biologia zelular eta molekularreko teknikak erabili ziren. Emaitza deskriptiboek PRR CRCaren abiarazle moduan joka lezakela iradoki dute, bere proteina adierazpena gradualki areagotzen baita polipo-minbizi sekuentzian zehar. Gainera, PRR biomarkatzaile potentziala kotsidera liteke heste-motako adenokartzinometan (azpimota histologiko arruntena). Izan ere, PRR CRCaren estadioaren araberako agresibitatea aurresateko gai da eta baita gaixoen biziraupearen indikatzailea da. Honen eragilea PRRak metastasiaren agerpenarekin daukan ustezko erlazioa izan liteke. Azterketa funtzionalek, bere aldetik, PRR minbiziaren markak eskuratzeko ezinbestekoa dela iradoki dute. Beste alde batetik, PRRaren adierazpena erregula lezaketen zenbait mikroRNA identifikatuz genituen. Azkenik, nahiz eta angiotensina peptidoak ez ziren serum peptidomaren profilean detektatu, C3f konplementuaren fragmentua eta protronbina CRC biomarkatzaile baliogarriak kontsidera litezteke, kontrol osasuntsu eta CRC gaixo metastsidun eta metastasigabeen artean bereizteko. Laburbilduz, PRR CRCaren abiarazle eta bultzatzaile kontsidera liteke. Ebidentzia hauek CRCrako biomarkatzaile edota itu terapeutiko berrien aurkikuntza ekar lezake CRCaren diagnostikoa, pronostikoa eta tratamendua hobetzeko.

La Enfermedad de Alzheimer (EA) afecta a más de 26 millones de personas a nivel mundial. La EA se caracteriza por la presencia de placas seniles (PS) formadas por depósitos de ß-amiloide (ßA) y por la de ovillos neurofibrilares (ONF) causados por la proteína tau hiperfosforilada (p-tau), los cuales se encuentran en el líquido cefalorraquídeo (LCR). Tanto las concentraciones de ßA como las de p-tau pueden verse alteradas hasta décadas antes de que la EA sea evidente, por lo que la detección de los niveles de estos biomarcadores se ha convertido en objeto de interés científico en la prevención de la enfermedad. Asimismo, existen factores de riesgo (FR) modificables para los que existe la evidencia de que intervienen en la neuropatología de la EA. El objetivo de este estudio fue estudiar la relación de los algunos indicadores del estado físico y de salud con los niveles de los biomarcadores de la Enfermedad de Alzheimer en líquido cefalorraquídeo en una muestra de personas adultas cognitivamente sanas. Los datos se tomaron de una cohorte formada por 205 personas (99 hombres y 106 mujeres). Los hallazgos de este estudio indican que algunos de los indicadores del estado físico y de salud saludables se relacionan con un mejor perfil de los biomarcadores de la EA en LCR en la etapa preclínica y que, por el contrario, algunos de los perjudiciales se vinculan con alteraciones desfavorables en la concentración de los biomarcadores estudiados.

La lesión e inflamación hepática y el desarrollo del carcinoma hepatocelular (HCC) se modulan en parte a través de la señalización de los receptores de tipo Toll (TLR). El receptor TREM2 (triggering receptor expressed on myeloid cells 2) modula la señalización derivada de TLR4 en macrófagos derivados de la médula ósea. Sin embargo, su papel en el hígado es desconocido. En este estudio, se investigó el papel del receptor TREM2 en la lesión hepática, en la regeneración hepática y en la hepatocarcinogénesis. Para ello, la expresión de TREM2 se analizó en tejido hepático humano cirrótico y en HCC en comparación con tejido hepático control. Además, se realizaron modelos experimentales de daño hepático aguda y crónico, de regeneración hepática y de HCC en ratones salvajes y Trem2-/-. Así, pudimos observar que la expresión de TREM2 se encontraba inducida tanto en tejido cirrótico como en HCC comparado con tejido hepático control y que TREM2 se expresaba en células hepáticas no parenquimales y se inducía tras la lesión hepática, la regeneración hepática y en el HCC en ratones. Además, Los ratones Trem2-/- desarrollan un mayor daño hepático, inflamación, peroxidación lipídica y reclutamiento de macrófagos tras la intoxicación con CCl4 o paracetamol. Por otro lado, los hígados Trem2-/- regeneran más rápido, ya que muestran una aumento de la proliferación hepatocitaria asociada a un incremento en la inflamación en estadios tempranos tras hepatectomía parcial. Finalmente, los ratones Trem2-/- desarrollan más tumores hepáticos tras la administración del hepatocarcinógeno dietilnitrosamina, asociado a un aumento en el daño hepático, inflamación, niveles de estrés oxidativo y proliferación hepatocitaria. En conclusión, TREM2 se presenta como una nueva diana terapéutica en el tratamiento de diversas enfermedades hepáticas, ya que actúa como un freno natural en la inflamación tras la lesión hepatocelular, siendo un regulador crítico en diversos tipos de lesión hepatotóxica y hepatocarcinogénica.

La lesión muscular tiene una enorme incidencia en la población, tanto en el ámbito del deporte como asociada a procesos quirúrgicos. En el caso de lesiones severas, su recuperación precisa de varias semanas, y los resultados son variables, desde una regeneración completa a recuperaciones parciales con tejido fibroso reemplazando a la estructura muscular previa. El Plasma Rico en Plaquetas (PRP) es un concentrado de plaquetas con valores superiores a los encontrados en sangre. Se obtiene habitualmente a partir de una muestra de sangre periférica y su posterior centrifugación para separar sus componentes. El concepto y descripción de PRP se inició en el campo de la hematología en los años 70, empleándose como un producto de transfusión en pacientes con trombocitopenia. Posteriormente, se utilizó como fibrina en la cirugía maxilofacial, y a principios de este siglo se comenzó a emplear infiltraciones de PRP y de suero autólogo en patologías del aparato locomotor. El PRP representa una nueva herramienta terapéutica en el tratamiento de la lesión muscular aguda. Dada su seguridad de uso y sus teóricos beneficios, como una regeneración tisular precoz y completa, se ha incrementado notablemente su aplicación durante la última década en el ámbito del deporte. Las acciones positivas del PRP en la lesión muscular han sido demostradas en múltiples investigaciones en ciencia básica, tanto en laboratorio como en animales. Se ha observado una proliferación aumentada de las células satélite, y también en su diferenciación hacia miofibras. Sin embargo, los resultados en humanos no son concluyentes. Existen solamente 7 estudios controlados aleatorizados sobre el tratamiento de las lesiones musculares con PRP. No se encontraron diferencias significativas en la baja deportiva en 3 estudios, y si se observaron en los otros 4. Hay que tener en cuenta que la variable principal analizada, la baja deportiva o tiempo de recuperación, depende de múltiples factores, lo que puede explicar las diferencias en los resultados. Son importantes los factores asociados al PRP, como su composición y el volumen empleado, o el tiempo transcurrido desde la lesión hasta la infiltración. También hay que valorar el pronóstico asociado a cada tipo de lesión, y la edad y las lesiones previas del jugador/a. Igualmente, es fundamental obtener muestras de participantes homogéneas, del mismo deporte y con un nivel de rendimiento similar, y los criterios de alta médica han de ser iguales para todos los participantes. La investigación planteada fue un ensayo clínico aleatorizado, ciego para los pacientes, donde se comparó el efecto de la infiltración de PRP Puro en lesiones musculares agudas severas en isquiotibiales, frente a la infiltración de un producto homeopático. El objetivo general fue analizar la relación entre la infiltración de PRP Puro y el tiempo de recuperación en la lesión muscular. Los objetivos específicos fueron: 1. Obtener un modelo predictivo de la baja deportiva en la lesión muscular. 2. Determinar la importancia de cada factor en la baja deportiva. 3. Proponer un protocolo de uso del PRP Puro en la lesión muscular. El estudio se realizó en 40 jugadores de fútbol federados, que fueron infiltrados en su mayoría entre las 24 y 72 horas tras la lesión muscular, y a los 9 días. Los criterios de alta médica fueron establecidos en 5 ámbitos: rendimiento funcional, fuerza, flexibilidad, dolor y autoconfianza. También se evaluó la distancia en triple salto unipodal y el dolor sentido desarrollando la velocidad máxima en 20 metros. Fueron analizadas distintas variables con capacidad de influir en la baja deportiva, como el tipo de lesión, el producto infiltrado (PRP Puro u homeopatía), el tiempo transcurrido hasta la infiltración (horas) y la edad del jugador, y las interacciones producidas entre el producto y el momento, y entre la edad y el momento.

El aumento de la esperanza de vida y el consecuente envejecimiento de la población ha dado lugar al incremento de la incidencia de diversas enfermedades en cuya fisiopatología interviene un estado inflamatorio crónico y de estrés oxidativo en el tejido afectado. La alta prevalencia de las enfermedades anteriormente mencionadas, así como su coste sociosanitario asociado, hacen necesario intensificar la investigación en el ámbito del estrés oxidativo y la cronificación de la inflamación con el objetivo de proponer estrategias terapéuticas más efectivas. Una de las estrategias más estudiadas ha sido la terapia antioxidante con diferentes fármacos. Por otro lado, en la actualidad, la terapia con células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo (AMSCs) supone un gran avance en la medicina regenerativa debido a las propiedades inmunomoduladoras, antiinflamatorias y antioxidantes de estas células. Además, se ha observado que es posible mejorar su capacidad reparadora mediante su exposición a un estímulo preacondicionador in vitro. En el presente trabajo hemos combinado diferentes técnicas de biología celular y molecular para evaluar el efecto de los siguientes tratamientos: (i) la terapia antioxidante con NAC, (ii) la terapia celular con AMSCs en co-cultivo o con su medio acondicionado (MSD), (iii) la terapia celular combinada con NAC, y (iv) el medio acondicionado (MPSD) de AMSCs preacondicionadas con dosis bajas de H2O2 (AMSCs-P). Los resultados muestran que el estrés oxidativo reduce la viabilidad de los fibroblastos de forma dosis dependiente. El tratamiento con NAC aumenta los niveles intracelulares de GSH y disminuye los radicales libres del oxígeno, pero no produce una recuperación de la proliferación de los fibroblastos sometidos a oxidación. El co-cultivo con AMSCs, así como el tratamiento con MSD, induce un aumento de la viabilidad y la recuperación de la proliferación de dichos fibroblastos. Esta terapia celular con AMSCs, se ve incrementada con la adición de NAC al medio de cultivo. Por último, se ha observado que el MPSD ejerce un mayor efecto terapéutico sobre los fibroblastos oxidados que el MSD debido, al menos en parte, a un incremento en la capacidad antioxidante del MPSD.

El colangiocarcinoma (CCA) incluye un grupo heterogéneo de cánceres biliares con mal pronóstico y que se relacionan con diversos factores de riesgo como la presencia de colangitis esclerosante primaria (PSC). No existen biomarcadores no invasivos sensibles y específicos para el diagnóstico diferencial de PSC, CCA y carcinoma hepatocelular (HCC). En los últimos años, las vesículas extracelulares (EVs) han surgido como importantes herramientas en la búsqueda de biomarcadores para diversas patologías y como importantes reguladores en la progresión de múltiples enfermedades. El presente estudio tiene como objetivo principal determinar posibles biomarcadores proteicos presentes en EVs de suero que permitan diagnosticar PSC, CCA y HCC. Se aislaron EVs de suero de pacientes, así como EVs derivadas de células de CCA humano y colangiocitos humanos (NHC), y se caracterizó su morfología (mediante microscopía electrónica), tamaño/concentración (mediante nanoparticle tracking analysis (NTA)) y presencia la de marcadores proteicos de EVs CD63, CD81 y CD9 (por immnunoblot). El análisis del contenido proteico de EVs de suero por espectrometría de masas (MS) reveló la presencia de biomarcadores sensibles y específicos para el diagnóstico diferencial de PSC, CCA y HCC. Además, la determinación del contenido proteico de EVs secretadas por células de CCA humano mediante MS identificó el enriquecimiento en diversas proteínas oncogénicas relacionadas con la progresión tumoral del CCA en comparación con EVs derivadas de NHC. Por último, se identificaron proteínas humanas en EVs de suero de ratones con implantes orto-tópicos de CCA humano, indicando que los tumores de CCA son capaces de secretar EVs que pueden ser detectadas en suero y participar en su patogenia. Por tanto, estos datos indican que las EVs de suero albergan biomarcadores diagnósticos para la PSC, CCA y HCC y que las EVs secretadas por las células de CCA pueden participar en la patogenia de este tumor.

Las enfermedades neurodegenerativas suponen un reto en el área de investigación biomédica, debido a su alta prevalencia derivada del envejecimiento de la población y a su coste sociosanitario. Por estas razones, resulta necesario el planteamiento de nuevas estrategias terapéuticas que aborden dos de los elementos clave en la fisiopatología de estas enfermedades neurológicas, la neuroinflamación y el estrés oxidativo. En el presente trabajo hemos combinado diferentes técnicas bioquímicas, electrofisiológicas e inmunohistoquímicas para evaluar el efecto terapéutico de las células madre mesenquimales humanas de tejido adiposo (ADSCs) y del medio acondicionado por estas células (ADSC-MA), frente a la neurotoxicidad inducida por estrés oxidativo. Dicha evaluación se ha realizado en un nuevo modelo de estrés oxidativo in vitro sobre células SH-SY5Y diferenciadas a estirpe neuronal mediante el tratamiento con ec23+BDNF (SH-SY5Yd). Además, hemos analizado si el efecto de la adición del factor de crecimiento BDNF o de un agente antioxidante como la N-acetilcisteína (NAC) al tratamiento con ADSC-MA mejora en mayor medida la recuperación de las células SH-SY5Yd dañadas con H2O2. Los resultados obtenidos en el estudio muestran que la exposición de las células SH-Y5Y a los agentes ec23+BDNF induce una óptima diferenciación hacía fenotipo neuronal, con una amplia arborización de neuritas largas y finas, lo que constituye un modelo reproducible y válido para estudios in vitro de toxicidad neuronal. La exposición de estas células diferenciadas a dosis moderadas de H2O2 altera el patrón morfológico (aparición de vesículas axonales relacionadas con la degeneración axonal) y electrofisiológico normales, y reduce de forma significativa su viabilidad. El tratamiento de las células SH-SY5Yd sometidas a estrés oxidativo con ADSC-MA permite la recuperación de los patrones morfológico y electrofisiológico, así como la viabilidad de dichas células. Este efecto está asociado a una reducción moderada de las especies reactivas del oxígeno (ROS) en dichas células, así como a la presencia en el MA de los factores BDNF y GDNF. El aporte adicional de BDNF al ADSC-MA previo al tratamiento de las células SH-SY5Yd sometidas a estrés oxidativo, no supone ningún beneficio terapéutico añadido respecto al obtenido con el tratamiento único con dicho MA. Por último, la adición de NAC al ADSC-MA reduce la eficacia terapéutica de dicho MA, lo cual se correlaciona, al menos en parte, con una drástica reducción de los niveles intracelulares de ROS producida por dicha combinación terapéutica.

El baloncesto en España ocupa el primer lugar en número de licencias federativas de mujeres. Por ello, el objetivo de esta tesis ha sido avanzar en el conocimiento de las características antropométricas y de la condición físicas determinantes para el rendimiento. Para su realización, se reclutaron 104 jugadoras clasificadas en grupo Liga Vasca (cadetes y júnior) y grupo Liga Femenina y se contó con la aprobación del Comité de Ética para la Investigación con Seres Humanos de la UPV/EHU (CEISH/305/2014). A todas participantes se les realizaron valoraciones de las características antropométricas y fisiológicas y se evaluó su rendimiento deportivo a partir de las estadísticas oficiales de la A.C.B (ACB, 2019) y de la Federación Vasca de Baloncesto. Tras el análisis estadístico, realizado mediante el programa estadístico IBM SPSS Statistics25, se observó que la altura, la longitud de fémur y pierna de las jugadoras cadetes del grupo Ligas Vasca, correlacionaron positivamente con los puntos promediados por partido obtenidos y que las jugadoras que cumplían estas características fueron más rápidas en el test de agilidad con balón (Dribbling). Además, cuanto menor capacidad de salto manifestaron las jugadoras cadetes, peores indicadores de rendimiento lograron (puntos, partidos disputado, puntos/partido). Por otro lado, las jugadoras junior más altas, con mayores longitudes de pierna y fémur y con mayor peso corporal, presentaron mejores valores de rendimiento (puntos promediados por partido). En el grupo Liga Femenina, los equipos mejor clasificados fueron aquellos que tuvieron jugadoras con menor tejido adiposos subcutáneo y que realizaron mejor la prueba de agilidad sin balón (T-Drill). Finalmente, se creó con las variables evaluadas un modelo de predicción del rendimiento (ICR/min) en el que, para las jugadoras del grupo de Liga Femenina resultó ser significativo (P<0.001) con una R2 de 0.705, siendo la prueba T-Drill, la altura, la edad y el perímetro del brazo contraído (PBC) las variables con mayor capacidad de predicción.

La alta prevalencia de sobrepeso y obesidad detectada en la población laboral española es preocupante no sólo porque pueden ser enfermedades incapacitantes, sino porque además empeoran el pronóstico de las enfermedades no transmisibles. Así, el objetivo de este estudio fue profundizar en las características relacionadas con el estilo de vida, socio-económicas y laborales que, junto a la susceptibilidad genética, pueden influir en la aparición del sobrepeso y obesidad en 317 personas trabajadoras (PDI y PAS) de la UPV/EHU. La prevalencia de sobrecarga ponderal aunque menor que en otros colectivos laborales, fue del 42,12%, aumentaba con la edad, y más tempranamente en hombres (>35 años) que en mujeres (>55 años). La actividad física se ajustó a las recomendaciones de la OMS pero no mostró asociación con el fenotipo, aunque sí con las horas de sueño (<7 h/día). Por el contrario, la ingesta calórica excesiva y de snacks así como el consumo deficitario de verduras y frutas, este último solo en hombres, mostraron ser factores de riesgo ponderal. La dieta se ajustó mejor al modelo de dieta Atlántica que al de Mediterránea. Además, el patrón dietético predominante, el Occidental, que emergió en el análisis de componentes principales, se asoció significativamente con los índices de adiposidad y de riesgo cardiovascular, confirmando los efectos negativos del alejamiento de la dieta Mediterránea. Se detectaron además otros 3 patrones, dos de ellos específicos de cada sexo. Se pudo confirmar también la asociación con diversas medidas de la obesidad de 4 SNP localizados en los genes PPARG, FAIM2, CETP y BDNF.

El melanoma maligno es un tumor originado en los melanocitos. En su etiología influyen factores ambientales, pero también factores genético hereditarios como algunos relacionados con genes de la pigmentación . La adquisición de determinadas mutaciones son las que determinan su comportamiento. Una de las vías más implicadas en la patogenia es la de las MAPK y la mutación de BRAFV600E es la mutación somática más frecuente. La evolución de los pacientes con melanoma es muy variable y los factores asociados al pronóstico que se usan en la clínica habitual, no estratifican adecuadamente el riesgo de progresión tumoral. Hemos estudiado la carga tumoral de BRAF V600E en tejido de biopsias escisionales de melanoma y curiosamente, observamos que la carga tumoral de dicha mutación, podría ser un buen predictor de metástasis en pacientes en estadio II. Además, identificamos que el alelo rs1042602-A estaba relacionado con susceptibilidad a melanoma, pero también, encontramos que dicho alelo se asociaba a peor supervivencia libre de enfermedad, sobre todo para pacientes varones.

Los antígenos del sistema Rh son los responsables de las reacciones hemolíticas asociadas a la incompatibilidad sanguínea donante ¿ receptor, de la inmunización en los pacientes politransfundidos, de la enfermedad del feto y del recién nacido (EHRN) como consecuencia de la incompatibilidad sanguínea materno-fetal (Connie 2010; Keramati et al; 2011) y de algunas anemias hemolíticas autoinmunes (Flegel, 2011). Debido a que algunas variantes del gen RHD son difíciles de detectar serológicamente y podrían ser mal descritas como Rh D negativo (D-), es necesario realizar un estudio exhaustivo de los donantes D- para identificar las unidades de hematíes que potencialmente pueden causar aloinmunización. Algunas de estas variantes D del sistema Rh potencialmente inmunogénicas, como DEL, D parcial, y algunos tipos weak D, con frecuencia no son detectados por pruebas serológicas de rutina (Daniels, 2013a). Como consecuencia, individuos D- transfundidos con sangre de donantes negativos mal clasificados (en realidad son D+ de difícil detección) pueden sufrir riesgo de aloinmunización anti-D. Para superar esta limitación serológica, el objetivo de este proyecto ha sido el desarrollo de una herramienta de detección molecular denominada ID RHD XT, basada en PCR multiplex y detección por tecnología X-MAP de Luminex®, aplicable tanto en pacientes como en donantes, que nos permita detectar ciertas variantes del gen RHD, así como los antígenos plaquetarios HPA-1a y HPA-1b (los cuales desempeñan un papel crucial por ser causantes de la trombocitopenia fetal/neonatal aloinmune o TFNA). Durante las fases de diseño, desarrollo de este test de genotipado en el que además se han cumplido los criterios preestablecidos de calidad y en los resultados en los estudios de verificación realizados son positivos se puede afirmar que el ensayo es preciso y fiable. El desarrollo de este ensayo constituye una herramienta aplicable en la rutina de los bancos de sangre como apoyo a la serología, lo que conduce a una mejora de la calidad de la asistencia sanitaria en la población reduciendo los problemas inmunológicos asociados a la terapia transfusional.

La infertilidad humana es un problema social que afecta a aproximadamente al 15% de la población mundial debiéndose en el 50% de los casos a un factor masculino. Son causa de infertilidad masculina los fallos durante la espermatogénesis, proceso de diferenciación y maduración espermática que puede conllevar a la pérdida de uno o varios cromosomas, denominada nulisomía y cuyo estudio se realiza mediante la técnica FISH. Nuestros resultados muestran diferencias estadísticamente significativas de los valores estudiados en el seminograma entre las muestras seminales de pacientes con resultado FISH alterado por presencia de nulisomías, sin llegar a ser considerados patológicos y no encontrando una relación entre padecer una patología seminal con la presencia de nulisomías. Además, observamos un impacto negativo de las nulisomías en los resultados de las TRAs, específicamente un descenso significativo en las tasas de formación de blastocistos, en la tasa de calidad embrionaria en dicho estadío, en la tasa de implantación y en la de gestación evolutiva. Complementariamente, procedimos a la caracterización proteómica de muestras seminales e identificamos una sobreexpresión de proteínas que forman parte del metabolismo lipídico, del ciclo de Krebs y de la cadena transportadora de electrones y una infraexpresión de enzimas que forman parte de la glicolisis en las muestras nulisómicas con respecto a las de donantes. Es decir, los espermatozoides nulisómicos presentan un metabolismo energético alterado lo que compromete su capacidad fértil. Además, identificamos y verificamos infraexpresión de la proteína de membrana extracelular DPP4/ CD26, por lo que podemos concluir que el anticuerpo de esta proteína podría emplearse como biomarcador diagnóstico y de selección de espermatozoides euploides.

El colangiocarcinoma (CCA) es un cáncer biliar raro y heterogéneo, con una incidencia y mortalidad creciente. Este estudio investiga el curso natural de CCA y sus subtipos en una cohorte paneuropea. El estudio incluyó 2.234 pacientes (hombre:mujer 1,29). El iCCA (n=1.243) se asoció con sobrepeso/obesidad (58,5%) y hepatopatías crónicas, incluyendo la cirrosis (12,6%) y/o hepatitis virales (10,4%); el pCCA (n=592) con la colangitis esclerosante primaria (8,8%); y el dCCA (n=399) con cálculos biliares (10,3%). Al diagnóstico, el 42,2 % de los pacientes tenían enfermedad local, el 29,4 % enfermedad localmente avanzada (LAD) y el 28,4 % enfermedad metastásica (MD). El CEA y el CA19-9 mostraron una baja sensibilidad diagnóstica (69,1% y 40,9% por debajo del punto de corte, respectivamente), pero su elevación se asoció con un mayor riesgo de presentar LAD [OR 2,16; IC95% 1,43-3,27] o MD [OR 5,88; IC95% 3,69-9,25]. Los pacientes sometidos a resección tumoral (50,3 %) mostraron el mejor pronóstico, en particular aquellos con margen de resección negativo (R0) [supervivencia global (SG) = 45,1 meses]; sin embargo, la afectación de los márgenes (R1) [HR 1,92; IC95% 1,53-2,41; SG = 24,7 meses] y la invasión de ganglios linfáticos [HR 2,13; IC95% 1,55-2,94; SG = 23,3 meses] comprometieron la supervivencia. Entre los pacientes con enfermedad irresecable (49,6%), la SG fue de 10,6 meses para los que recibieron terapias anti-cancer, principalmente quimioterapia (26,2%). Los pacientes que recibieron la mejor atención de apoyo (20,6%) tuvieron una SG de 4,0 meses, siendo el iCCA el que peor pronóstico mostraba. El estado funcional [HR 1.52; IC95% 1.01-2.31], la presencia de metástasis [HR 4.03; IC95% 1.82-8.92] y el CA19-9 [HR 2.79; IC95% 1.46-5.33] fueron factores de pronóstico independientes.

La artrosis de cadera es una enfermedad inflamatoria de bajo grado, altamente prevalente en la población mundial. Los tratamientos conservadores de esta enfermedad se limitaban al tratamiento de los síntomas asociados. La artrosis en una enfermedad compleja, que involucra a todos los tejidos articulares. Entre ellos, el hueso subcondral juega un papel fundamental en la regulación de la homeostasis articular y del cartílago. Así mismo en un reservorio fundamental de células mesenquimales estromales (MSC), con una función inmunomoduladora clave en los procesos de homeostasis de la articulación. La afectación de este hueso subcondral, con la consecuente alteración de las células mesenquimales presentes en él, ha puesto el foco en el desarrollo de nuevas terapias que permitan un tratamiento más completo de la enfermedad, entre las que se encuentran las infiltraciones con PRP intraóseo. En este trabajo se describe por primera vez la técnica de infiltración de PRP intraóseo en la articulación de la cadera, demostrando que es una técnica segura y reproducible. Así mismo, se muestran los resultados clínicos de un estudio piloto sobre pacientes con artrosis severa de cadera tratados con PRP intraóseo, que demuestra la superioridad de este tratamiento comparado con las infiltraciones intraarticulares. Por último, se ha estudiado por primera vez en humanos, el efecto que el PRP intraóseo tiene en las MSCs del hueso subcondral en su propio nicho celular, hallando un efecto positivo de este tratamiento en lo que se refiere a proliferación celular, resistencia a la senescencia y expresión de genes asociados con la formación ósea y la remodelación del cartílago.

La apnea obstructiva del sueño puede acarrear graves consecuencias en los pacientes que la padecen tanto a nivel sistémico como a nivel oral. En muchos casos, es necesaria la colocación de dispositivos de avance mandibular para permeabilizar la vía aérea. La apnea osbtructiva del sueño puede llegar a provocar la pérdida prematura de dientes y acabar provocando una atrofia severa a nivel del maxilar superior e inferior. Dicha pérdida de volumen óseo tanto a nivel horizontal como a nivel vertical puede dificultar la colocación de implantes y la rehabilitación a nivel oral mediante una prótesis implantosoportada. Existen diversas técnicas descritas en la literatura para corregir dichas deficiencias de hueso. Sin embargo, todas ellas suponen un riesgo de aparición de complicaciones además de prolongar en el tiempo la restauración protésica. De esta manera, los implantes cortos y extracortos suponen una solución terapéutica óptima para la resolución de estos casos, minimizando las complicaciones quirúrgicas y permitiendo la rehabilitación oral lo más tempranamente posible, posibilitando poder llevar a cabo el tratamiento lo más precoz de la apnea obstructiva del sueño.

La Enfermedad de Alzheimer es una enfermedad neurodegenerativa crónica que se caracteriza principalmente por una perdida gradual de memoria. Actualmente, no dispone de tratamiento y su etiopatogenia es desconocida, siendo la cascada amiloide una de hipótesis más aceptadas. En esta hipótesis, se sugiere una fase inicial en la que se produce la acumulación del péptido amiloide en los espacios interneuronales que posteriormente conlleva la formación de ovillos neurofibrilares y lesiones a nivel neuronal. En la fase preclínica, los individuos afectados no muestran sintomatología más allá de manifestaciones a nivel bioquímico. Más adelante, comienzan los primeros síntomas y se desarrollará la fase clínica con un deterioro progresivo del paciente. La Enfermedad de Alzheimer se considera una patología con origen multifactorial. Aunque algunos de estos factores no son modificables, como la edad, el gen APOE y el sexo femenino, otros si son modificables, como los factores asociados al riesgo cardiovascular. Este estudio se centra en la fase preclínica de la enfermedad, y su objetivo principal es determinar la asociación de las características sociodemográficas y el estado de salud en una muestra de personas adultas cognitivamente sanas con la evolución de los biomarcadores de la Enfermedad de Alzheimer en el líquido cefalorraquídeo. Para ello, se desarrolló un estudio prospectivo longitudinal enmarcado dentro del Proyecto Gipuzkoa Alzheimer, en el que se reclutaron 180 hombres y mujeres cognitivamente sanos. Todos ellos dieron su consentimiento para participar en dos fases del estudio (PGA1 y PGA2) y para la recogida de líquido cefalorraquídeo. Se recogieron las siguientes variables: edad, antecedentes familiares de demencia, parámetros de salud cardiovascular (antropometría, tensión arterial, glucemia y valores lipídicos), así como los niveles de los biomarcadores proteínas Tau y pTau, péptidos Beta amiloide 40 y 42 en líquido cefalorraquídeo, y el genotipo APOE. Posteriormente se llevó cabo un análisis estadístico de los valores obtenidos. Los parámetros de salud de los participantes en ambas fases del estudio se situaron en los límites recomendados, salvo los valores antropométricos y lipídicos, que fueron superiores a lo recomendado. Estos valores, mejoraron entre las fases PGA1 y PGA2 del estudio. Los niveles de los biomarcadores medidos en líquido cefalorraquídeo aumentaron sus valores a lo largo de las dos fases del estudio. Al correlacionar los factores de riesgo cardiovascular y los biomarcadores, no se obtuvieron asociaciones estadísticamente significativas en el caso de los valores antropométricos ni de glucemia, pero sí con respecto al perfil lipídico y la tensión arterial. Tras la realización de modelos de regresión lineal, se pudo comprobar que la edad y ser portador del alelo ApoE-¿4 se asociaba un peor perfil de los biomarcadores de la Enfermedad de Alzheimer y que la tensión arterial sistólica elevada se asociaba a menores niveles del péptido amiloide, independiente del sexo, del consumo de medicación o de la predisposición genética de los portadores del alelo ApoE-¿4. La principal conclusión de este trabajo es que los factores de riesgo cardiovascular están relacionados con la evolución de los biomarcadores de la Enfermedad de Alzheimer en líquido cefalorraquídeo, variando dichas asociaciones según el sexo, la toma de medicación, la edad y el alelo ApoE-¿4.

El colangiocarcinoma (CCA) es un conjunto de tumores que se originan en la vía biliar y debido a su carácter asintomático, se diagnostican en fases muy avanzadas, limitando sustancialmente las posibles opciones terapéuticas. Actualmente, no existen biomarcadores precisos para la detección del CCA, particularmente necesarios para individuos con factores de riesgo como por ejemplo los pacientes con colangitis esclerosante primaria (CEP). En este sentido, las vesículas extracelulares (VE) se han postulado como contenedores de biomarcadores no invasivos para diversas patologías. Por tanto, en este estudio se evaluó el contenido transcriptómico y proteómico de VEs de suero y orina con el objetivo de identificar moléculas de ARN y proteínas que reflejasen la naturaleza del CCA y permitiesen la predicción del desarrollo, el diagnóstico temprano y la estimación de pronóstico del CCA de manera no invasiva. El análisis de ARN por microarrays de expresión génica determinó la presencia de ciertos transcritos en VEs de pacientes con CCA con alta capacidad diagnóstica y con una tendencia similar al tejido tumoral de CCA en comparación con tejido adyacente sano en muchos ARNm, mostrando la utilidad de ARN en VEs de suero y orina como una posible estrategia de biopsia líquida. Del mismo modo, el análisis por espectrometría de masas de proteínas en VEs de suero reveló la presencia de ciertos biomarcadores proteicos con capacidad de predecir el desarrollo del CCA en pacientes con CEP, detectar el CCA en estadíos tempranos tanto en pacientes con CEP como en individuos sin etiología CEP y predecir la supervivencia total de pacientes con CCA. La combinación de ciertos biomarcadores mediante algoritmos de logística binaria aumentó la capacidad clínica de los biomarcadores individuales y el hecho de que muchos de los biomarcadores no invasivos se expresasen en las células malignas del tumor reveló el posible origen de esos biomarcadores de biopsia líquida circulantes. Por tanto, la validación de estos biomarcadores candidatos a biopsia líquida mediante técnicas trasferibles a la clínica nos acercará a la detección temprana, específica y no invasiva del cáncer biliar, así como a la medicina personalizada.

La artrosis de rodilla es una enfermedad prevalente de difícil control. Las terapias con PRP para el tratamiento de esta patología han demostrado un buen control clínico de la enfermedad. Diversos factores influyen en los efectos biológicos del PRP, entre los que se encuentran la composición del PRP, la edad del donante o el modo de aplicación del tratamiento. El presente trabajo analiza en primer lugar el efecto del PRP sobre el hueso subcondral. Dado que el hueso subcondral es un elemento clave implicado en esta patología, se estudia el efecto biológico y estructural que tiene sobre éste la infiltración intraósea con PRP, utilizando un modelo murino. Así mismo se estudió la influencia de la edad en la eficacia del tratamiento con PRP en ese mismo modelo animal. En un segundo trabajo se evaluó la influencia de la edad del donante en los en modelos celulares neurales, en los cuales se observó, entre otros, un efecto antiinflamatorio mayor tras la aplicación de PRP de donantes jóvenes, el cual también presentaba un perfil menos proinflamatorio que el de donantes de edad avanzada. Por último se evaluó la influencia de la vía de administración del PRP en el tratamiento de la artrosis grave de rodilla, teniendo en cuenta los aspectos clínicos. Se evaluó la respuesta al tratamiento de la vía intraarticular comparándola con la vía intraósea de administración, encontrándose en esta última unos mejores resultados clínicos. El PRP es una herramienta eficaz en el tratamiento de la artrosis de rodilla y la vía de administración es un elemento clave para el resultado clínico. Además, la eficacia también puede verse afectada por la composición molecular del PRP la cual está condicionada, entre otros posibles factores, por la edad del donante.

El objeto de esta tesis doctoral ha sido la caracterización proteómica y lipidómica de cinco poblaciones celulares de la córnea humana para la identificación de nuevos biomarcadores de cada tipo celular. Además, se han empleado las poblaciones celulares caracterizadas para el desarrollo de un sistema de monitorización de la respuesta inmune humoral frente a injerto generada por trasplantes de córnea. Para esto, se han extraído cinco tipos celulares de corneas humanas y sus extractos se han analizados mediante ensayos de proteómica. En paralelo, se han estudiado extractos celulares, cortes de córnea y células corneales inmovilizadas sobre portas de vidrio utilizando distintos métodos lipidómicos. Así mismo, se han empleado sueros de pacientes que hayan recibido al menos un trasplante corneal para detectar anticuerpos reactivos frente al injerto, utilizando las células corneales previamente caracterizadas como dianas antigénicas. Los resultados obtenidos demuestran que cada tipo celular tiene un perfil proteómico y lipidómico único que permite diferenciarlos entre sí. Además, se ha propuesto un biomarcador proteico para la identificación de células epiteliales progenitoras del limbo esclerocorneal, relacionadas con la regeneración corneal, y que podría ser de gran interés para mejorar la terapia celular en casos de la deficiencia en células madre limbares. En cuanto al estudio lipidómico, se ha visto que los tipos de ácidos grasos son diferentes en zonas concretas de la córnea, dando lugar a una distribución específica que se podría relacionar con la funcionalidad de cada región. Por otro lado, se ha conseguido realizar una prueba de concepto del sistema de monitorización de la respuesta inmune humoral, en la que se han identificado anticuerpos reactivos en sueros de pacientes que habían recibido al menos un trasplante corneal.

La inducción de parto tiene como objetivo la finalización de la gestación por vía vaginal, ante condiciones maternas o fetales que pongan en riesgo el embarazo. Para la valoración del pronóstico de dicha inducción de parto, el método más aceptado es la valoración del cérvix uterino mediante tacto vaginal (test de Bishop), si bien este método es subjetivo y con una escasa capacidad de predicción. Diversas variables han sido propuestas en los últimos años como candidatas a mejorar la predicción del resultado de la inducción, entre ellas numerosas variables ecográficas. Estas variables ecográficas, según la evidencia científica, parecen más reproducibles y con una mayor capacidad de predicción que el test de Bishop. Por otro lado, el análisis mediante algoritmos matemáticos de la imagen ecográfica adquirida antes de la inducción de parto, podría mejorar adicionalmente esta capacidad de predicción. La hipótesis de la presente tesis doctoral se basa en que el análisis de las imágenes ecográficas del cérvix uterino, en gestaciones simples, en cefálica y a término, adquiridas antes de la inducción de parto, puede permitirnos desarrollar modelos predictivos más válidos y precisos que los basados en la exploración física. Se ha llevado a cabo un estudio unicéntrico prospectivo observacional de cohortes, incluyéndose una muestra final de 265 gestantes en cefálica y a término. Se recogieron numerosas variables epidemiológicas, obstétricas, físicas, bioquímicas y ecográficas para cada una de las embarazadas, así como los datos clínicos de su proceso de inducción y parto. Se diseñaron modelos de predicción multivariable para cada una de las variables resultado recogidas, siendo la variable resultado principal el parto mediante cesárea tras inducción de parto. Tras el análisis de resultados, podemos concluir que los modelos de predicción multivariable, que incluyen variables ecográficas, son los que alcanzan mejor capacidad de predicción de las variables resultado de la inducción de parto. Además, esta capacidad de predicción de los modelos multivariable es significativamente mejor que la capacidad de predicción del test de Bishop.

Ha aumentado el interés en la Educación en Neurociencia del Dolor (PNE) como enfoque terapéutico para el manejo de la fibromialgia (FM). Objetivos: se propone una intervención de PNE que añade la hipótesis de error evaluativo aprendido para conocer si es más efectiva que el tratamiento habitual (TH) para reducir el impacto de la FM. Métodos: se realizó un ensayo multicéntrico, aleatorizado, abierto y controlado para evaluar la efectividad de una intervención grupal estructurada, en Atención Primaria, basada en PNE, en pacientes con FM. Se incluyeron 139 pacientes, asignados al azar al grupo intervención (7 sesiones de PNE) o al grupo control (TH solamente). El resultado primario fue la mejora del estado funcional y el dolor, medidos con el Cuestionario de Impacto de la FM (FIQ), y los resultados secundarios fueron la reducción del impacto del dolor y otros síntomas (catastrofización, ansiedad y depresión). Resultados: al cabo de un año, las mejoras en las puntuaciones del FIQ fueron mayores en el grupo intervención, con un tamaño de efecto moderado o alto, con disminuciones en el FIQ ¿20% en el 69.1% de los pacientes (20.9% en el grupo control), ¿50% en el 39.7% (4.5% en el grupo control), y con FIQ¿39 puntos en 52.9% (13.4% en grupo control). Conclusiones: se obtuvo una mejora en la calidad de vida y en el control de los síntomas de pacientes con FM al agregar una intervención de PNE, igualando o superando los resultados previamente publicados. Se plantea como una nueva alternativa para abordar el manejo de síntomas persistentes sin daño tisular correlacionado, y aporta una hipótesis etiológica.

Los efectos beneficiosos de los programas de ejercicio físico multicomponente (EFM) en las personas mayores son de sobra conocidos. Como también lo es que la mayoría de las personas mayores no cumplen con la cantidad recomendada de actividad física semanal y que quienes habitualmente sí lo hacen, a menudo interrumpen su participación continuada en los programas de EFM por diferentes motivos. Por todo ello, es necesario conocer los posibles efectos beneficiosos, en la salud física y mental de las personas mayores, de realizar una dosis mínima de EFM, así como las consecuencias del cese de los programas de EFM. La pandemia COVID-19 provocó cambios radicales en los estilos de vida de las personas mayores, incluido el acceso a los programas de ejercicio físico. Además, al comienzo de la pandemia COVID-19 se estableció un confinamiento obligatorio en las viviendas durante 7 semanas. La mayoría de los estudios que han analizado las consecuencias, en la salud física y mental de las personas mayores, de las restricciones e interrupciones de los programas de ejercicio físico durante la pandemia COVID-19 no han analizado parámetros objetivos en evaluaciones presenciales. Tampoco existen muchos estudios que evalúen de manera objetiva los efectos de la reanudación de dichos programas en la salud física y mental de esta población. Teniendo en cuenta estos antecedentes, esta tesis presenta los resultados de 3 estudios: en el primero, se compararon los efectos, en la salud física y mental y en la fragilidad de las personas mayores, de un programa de EFM con una frecuencia de 1 sesión semanal frente a uno de 2 sesiones semanales, ambos de 35 semanas de duración; en el segundo, se analizaron los cambios en la salud física y mental y la fragilidad de las personas mayores inscritas en un programa de EFM durante 2 años, realizando un seguimiento a las personas participantes desde octubre de 2018 hasta octubre de 2020, incluidos 7 meses de interrupción del programa durante la pandemia COVID-19; en el tercero, se analizaron los efectos de la reanudación de un programa de EFM, tras una interrupción de 15 meses, incluyendo 7 meses de pandemia COVID-19. En los 3 estudios, en las sesiones de los programas de EFM, se realizó entrenamiento de fuerza a intensidad moderada combinado con trabajo de coordinación, flexibilidad y equilibrio durante 1 hora. Así mismo, en los 3 estudios se analizaron los parámetros cardiovasculares y antropométricos, la condición física, el nivel y la prevalencia de la fragilidad, la calidad de vida, los niveles de ansiedad y depresión, y el nivel de soledad percibida de las personas participantes. Los resultados muestran, por un lado, que los programas de EFM evaluados son eficaces en la mejora de la salud física y psicoafectiva, y en la reducción de la fragilidad y la prevalencia de la misma de las personas mayores. Sin embargo, el programa de EFM de 2 sesiones semanales obtuvo mayores beneficios tanto en la mejora de la condición física y la salud psicoafectiva como en la reducción de la fragilidad y la prevalencia de la misma de las personas mayores en comparación con el programa de EFM de 1 sesión semanal. Además, el programa de EFM de una sesión semanal no fue suficiente para prevenir el deterioro de la capacidad cardiovascular de las personas mayores. Por otro lado, se observó que tanto tras los 3 meses de descanso veraniego, como tras los 7 meses de interrupción provocada por la pandemia COVID 19, se produjo un deterioro en la salud física y psicoafectiva de las personas mayores, y un aumento de la fragilidad y la prevalencia de la misma. Estos cambios fueron de mayor entidad durante los 7 meses de interrupción provocada por la pandemia COVID-19 que durante la interrupción estival. Por último, se demostró que la reanudación del programa de EFM, tras una interrupción de 15 meses, incluyendo 7 meses de pandemia COVID-19, fue efectiva para recuperar la salud física y psicoafectiva, y para reducir la fragilidad y la prevalencia de la misma en las personas mayores. Estos resultados destacan la importancia de que las personas mayores participen en programas de EFM para mantener y/o mejorar su salud física y psicoafectiva, así como los niveles de fragilidad. Estos beneficios pueden ser alcanzados incluso con dosis mínimas de 1 sesión semanal. Además, los resultados destacan la necesidad de mantener los programas de ejercicio físico de forma regular, y/o fomentar la actividad física y reducir el comportamiento sedentario en las personas mayores, especialmente en situaciones como las vividas durante la pandemia de COVID-19. Finalmente, nuestros resultados destacan la importancia de reanudar lo antes posible los programas de EFM en personas mayores tras los periodos de interrupción de los mismos.

El receptor para colágeno DDR1 está implicado en la progresión y la metástasis de multitud de tipos de cáncer, incluido el carcinoma colorrectal. En la mayoría de los casos, las células tumorales de colon metastatizan en el hígado, penetrando a través de los capilares o sinusoides hepáticos, y conformando un microambiente tumoral hepático complejo y único. Pese a la importancia del estroma hepático durante el proceso de invasión tumoral, la expresión y funcionalidad del DDR1 en las células sinusoidales del hígado se desconoce.

La progresión de enfermedades hepatobiliares crónicas, tales como las enfermedades colestásicas (entre las que destacan la colangitis biliar primaria y la colangitis esclerosante primaria), así como el carcinoma hepatocelular (HCC), es un proceso complejo en el cual participan distintos mecanismos moleculares. La señalización derivada de productos bacterianos que se translocan del intestino al hígado, se propone como un mecanismo clave en esta progresión. El receptor TREM2 (tiggering receptor expressed on myeloid cells 2) modula estas señales por su acción en los receptores TLR (toll like receptors). En esta tesis doctoral se ha investigado el papel del receptor TREM2 en el desarrollo de la colestasis y el carcinoma hepatocelular. Nuestros resultados muestran que la expresión de TREM2 incrementa en el tejido hepático de pacientes con colestasis en comparación a tejido hepático sano, esta observación se confirma en hígado de ratón. Además ratones deficientes en Trem2 muestran una respuesta exacerbada, caracterizada por una mayor expansión biliar, muerte celular e inflamación, ante el daño inducido por colestasis en distintos modelos murinos de esta condición patológica. Estos efectos son en parte dependientes de la acción de TREM2 sobre la señalización derivada de productos bacterianos en TLRs. Además, los receptores TREM1 y TREM2 median algunos de los efectos beneficiosos del ácido ursodeoxicólico en las células de kupffer, siendo el UDCA un ácido biliar endógeno que se considera el tratamiento de referencia para las enfermedades colestasicas. En tumores de HCC, TREM2 se expresa mayormente en macrófagos residentes e infiltrados, y en modelos murinos de HCC asociado a fibrosis, ratones deficientes en Trem2 muestran una mayor carcinogénesis hepática. En conclusión, TREM2 se presenta como una nueva diana terapéutica en el tratamiento de diversas enfermedades hepáticas, ya que actúa como un freno natural en la inflamación tras la lesión hepatocelular, siendo un regulador crítico en diversos tipos de lesión hepatobiliar y carcinogénesis.

La conjuntivitis alérgica, es un proceso inflamatorio inmunológico común de la superficie anterior del ojo que representa un conjunto de trastornos de hipersensibilidad ocular que afectan al párpado, la conjuntiva y la córnea. La conjuntivitis alérgica es la principal patología dentro de las alergias oculares representando el 80 ¿ 90% de las mismas, y está causada por la respuesta ocular a los alérgenos ambientales que pueden afectar negativamente a la calidad de vida de los pacientes afectados. La prevalencia de la alergia ocular ha ido en aumento en todo el mundo durante las últimas décadas y, en la actualidad, aproximadamente el 20% de la población mundial está afectada por algún tipo de alergia. A medida que aumenta la prevalencia de la conjuntivitis alérgica, también aumenta el desarrollo de nuevos fármacos para la prevención y el tratamiento de esta afección. Los antihistamínicos orales, los estabilizadores de la granulación de mastocitos y los agentes tópicos de acción dual se consideran estrategias de manejo de primera línea debido al alivio de los síntomas y signos y a la tolerabilidad que proporcionan. No obstante, la instilación tópica de formulaciones oftálmicas sigue siendo la vía más común, segura y fácil de administración de fármacos oculares, y representa el tratamiento de elección para muchas enfermedades oculares. Alrededor del 80% de las formulaciones oftálmicas disponibles en el mercado se presentan en formato multidosis y, requieren de conservantes que proporcionan actividad antimicrobiana para mantener la esterilidad durante todo el tiempo de uso previsto. El conservante más utilizado es el cloruro de benzalconio (BAC), presente en aproximadamente el 70% de las formulaciones oftálmicas. Sin embargo, la administración continua de estas formulaciones oftálmicas con conservante genera efectos tóxicos e inflamatorios sobre la superficie ocular, que dañan las células epiteliales de la córnea y la conjuntiva y, además, se ha asociado con alteraciones de la película precorneal como la inestabilidad de la película lagrimal observándose, en los pacientes con sequedad iatrogénica, una tendencia a agravar el problema ya existente. En consecuencia, tal y como indican las actuales directrices, siempre que sea posible se deberán utilizar formulaciones tópicas sin conservantes para minimizar los efectos adversos causados por la inclusión de estos en la superficie ocular y, preservar la estabilidad e integridad de la película lagrimal. Recientemente, FAES FARMA ha desarrollado una nueva formulación oftálmica multidosis de bilastina 0,6% sin conservantes que contiene ácido hialurónico y, que permite una pauta de dosificación de una vez al día para el tratamiento tópico de la conjuntivitis alérgica. Bilastina es un antihistamínico H1 de segunda generación recomendado para el tratamiento sintomático de la rinoconjuntivitis alérgica estacional o perenne y la urticaria en adultos y niños que se caracteriza por un inicio de acción rápido, un efecto prolongado y por sus propiedades no sedantes. La formulación oftálmica desarrollada además de ser estable, eficaz y segura muestra una buena tolerabilidad y proporciona hidratación conjuntival a la vez que promueve la reepitelización corneal. Aunque hay una gran cantidad de estudios de eficacia de formulaciones oftálmicas tópicas para el tratamiento de la conjuntivitis alérgica, son pocas las publicaciones en la literatura que estudien su impacto sobre los procesos que pueden comprometer la homeostasis de la película lagrimal y la integridad de la superficie ocular. Por ese motivo, en la presente tesis doctoral, se aborda de forma comparativa el estudio del efecto que pueden tener las principales formulaciones antialérgicas de uso tópico presentadas en forma de colirio existentes en el mercado frente a la nueva formulación oftálmica de bilastina sobre los principales procesos relacionados, mediante la realización de una caracterización fisicoquímica y el estudio a nivel preclínico utilizando modelos experimentales in vitro, ex vivo e in vivo. Los resultados obtenidos han demostrado que la formulación multidosis de bilastina oftálmica 0,6%, además de ser una formulación óptima para el tratamiento de los síntomas oculares derivados de la conjuntivitis alérgica, es una buena alternativa terapéutica para preservar la salud ocular de los pacientes, siendo en ciertos aspectos superior al resto de formulaciones oftálmicas testadas durante la tesis doctoral. Así, su formulación permite mantener la homeostasis de la superficie ocular y preservar la estabilidad e integridad de la película lagrimal, además de proporcionar una actividad hidratante, lubricante y reepitelizante.

La diabetes mellitus es una de las enfermedades crónicas más habituales en países occidentales. Los casos van en aumento y se estima que sigan haciéndolo y, en consecuencia, se espera que las comorbilidades asociadas como la nefropatía diabética y la aterosclerosis también lo hagan. A pesar de las terapias ya existentes para el control de la glucemia, de la hipertensión y del colesterol es necesario encontrar fármacos enfocados al tratamiento de la inflamación y del estrés oxidativo, factores clave y comunes en el desarrollo de las comorbilidades diabéticas. Encontrar nuevas terapias, o terapias coadyuvantes, es algo fundamental para poder frenar el desarrollo de estas enfermedades. En ese sentido, los flavonoides son compuestos antioxidantes naturales que han demostrado tener, entre otras, propiedades antidiabéticas. Estas propiedades se basan principalmente en la capacidad que tienen los flavonoides para modular el microambiente inflamatorio, oxidativo y lipotóxico, que conducen a un efecto protector en los tejidos y órganos afectados por la diabetes. La Hidrosmina es un flavonoide sintético indicado para el tratamiento a corto plazo del edema y los síntomas relacionados con la insuficiencia venosa crónica en adultos, que lleva comercializado por Faes Farma en forma de cápsulas de liberación inmediata desde 1985, bajo el nombre de ¿Venosmil 200 mg cápsulas¿ con una administración de 3 veces al día. En esta tesis doctoral se plantea la hipótesis de que la Hidrosmina pudiera tener un efecto protector a nivel renal y cardiovascular, pudiendo revertir la inflamación asociada a la nefropatía diabética y la aterosclerosis y así paliar los efectos provocados por la hiperglucemia de la diabetes, siendo útil como terapia coadyuvante en el tratamiento de la diabetes y sus comorbilidades. Asimismo, se plantea el desarrollo de un nuevo medicamento para el tratamiento de dichas complicaciones. Para ello, se investiga en modelos in vitro si la Hidrosmina mejora el fenotipo de células renales en condiciones que mimetizan el ambiente de la diabetes. Hidrosmina no afecta a la viabilidad ni proliferación de células epiteliales renales y reduce el microambiente inflamatorio en condiciones simuladas de diabetes. También se investiga en modelos preclínicos in vivo si la Hidrosmina revierte total o parcialmente las comorbilidades asociadas a la diabetes (nefropatía diabética y aterosclerosis) en modelos de diabetes tipo 1 (modelo de ratones deficientes en apolipoproteína E con diabetes inducida por estreptozotocina) y diabetes tipo 2 (modelo de ratones deficientes en el gen de la leptina y modelo de ratones deficientes en el gen del receptor de la leptina). Hidrosmina protege frente al daño renal y la aterosclerosis disminuyendo el microambiente inflamatorio y dislipemias asociadas en un modelo preclínico de diabetes tipo 1 y muestra un efecto reductor del daño renal a nivel histológico sin modificar dislipemias asociadas en modelos preclínicos de diabetes tipo 2. Asimismo, se desarrolla, escala, valida el proceso de fabricación y se caracteriza una formulación de comprimidos de liberación prolongada de Hidrosmina. Se desarrolla un comprimido con la dosis de 600 mg de Hidrosmina y se valida el proceso de fabricación a nivel industrial, se desarrolla un comprimido placebo y se estudia la viabilidad de fabricar un comprimido de liberación prolongada de Hidrosmina 600mg recubierto con Losartán. Por último, se investiga la biodisponibilidad y farmacocinética de la formulación de liberación prolongada de Hidrosmina desarrollada y se concluye que el comprimido de liberación prolongada de Hidrosmina 600 mg es intercambiable con las cápsulas de liberación inmediata de Hidrosmina 200 mg.

Adineko pertsonen erorikoak hauskortasunarekin estuki erlazionaturik daude, eroriko gehiago gertatzen direla ikusi baita hauskortasun egoera batean. Horregatik, adineko pertsonetan hauskortasun egoera baten aurreikuspena lantzeak erorikoak gutxiagotu ditzake. Ideia honetatik abiatuz, tesi honetan, alde batetik, egoitzetan bizi diren adinekoen erorketen zein hauskortasunaren azterketa egin da. Bestetik, hauskortasunaren indikatzaile egokiak zein erorketak aurreikusteko erraza, sentikorra eta espezifikoa den probak zeintzuk izan daitezkeen bilatu nahi izan dira. Honetarako, Gipuzkoako 16 egoitza ezberdinetako 199 adineko pertsonen egoera funtzionala, egoera fisikoa, egoera kognitiboa eta egoera psikoafektiboa kontuan hartu dira. Gizonezko eta emakumezko egoiliarren profil desberdina ikusirik, bata eta besteari eskaini beharreko arreta egokitu behar dela ikusi dugu. Hauskortasunaren hiru galdetegiak kontuan hartuta lagin osoan faktore guztiek izan zuten eragina. Aldiz, sexuka aztertzean, hauskortasunean eragina zuten faktoreak ezberdinak ziren erabilitako galdetegien arabera; Fried fenotipoan eta Rockwood eskala klinikoan dimentsio fisikoak indar gehien zuen bitartean, Tilburg indizean dimentsio psikoafektiboak zuen indar gehien. Bestetik, hauskortasunaren indikatzaile sentikor eta espezifikoen artean, egoera fisikoko probak, Barthel galdetegia, eta emakumezkoetan batez ere, egoera psikoafektiboko parametroak izan ziren. Erorketei dagokionez, hauetan eragina izan zuten parametroen artean adina, egoera funtzionala, egoera fisikoa, hauskortasuna, ikasketa maila eta egoera psikoafektiboa aurkitzen ziren. Erorketak aurreikusteko parametro espezifiko eta sentikor bakarra lagin osoan, Barthel galdetegia izan zen. Sexukako azterketan, ordea, gizonezko egoiliarretan Barthel galdetegiaz gain, SPPB proba, TUG proba eta Rockwood eskala klinikoa izan ziren. Emakumezko egoiliarretan, adina, GMI-a, Barthel galdetegia, Tilburg indizea eta Goldberg-en depresioaren galdetegia izan ziren proba sentikor eta espezifikoak. Honela, agerian geratzen da egoiliarren balorazio integrala egitearen garrantzia eta ondorioz, zainketak indibidualizatu eta pertsonak osotasunean artatu behar direla.

El objetivo fundamental de esta tesis ha sido estudiar las propiedades sistémicas del movimiento migratorio celular. Para ello hemos realizado tres investigaciones principales: (I) estudio del comportamiento asociativo (tipo-Pávlov) en la migración de tres especies de organismos unicelulares, (II) análisis cuantitativo del carácter sistémico de la migración celular, y (III) análisis cuantitativo del carácter sistémico de la migración celular en células enucleadas. En resumen, este trabajo ha consistido en averiguar si la locomoción celular está caracterizada por la propiedad del condicionamiento asociativo y si, además, este comportamiento migratorio constituye un complejo proceso fisiológico-molecular, sistémico, autorregulado, altamente coordinado e integrado a escala global.

El estilo de vida occidental ha provocado un aumento de la prevalencia de varias enfermedades que afectan al hígado. Por un lado, la obesidad, que se ha convertido en una pandemia mundial, aumenta el riesgo de desarrollar la enfermedad del hígado graso no alcohólico (EHGNA) además de otros tipos de cáncer como el carcinoma hepatocelular (CHC). Por otro lado, la amplia disponibilidad y el abuso del paracetamol (APAP) han provocado que la lesión hepática inducida por este fármaco se convierta en la causa más común de fallo hepático aguda. Ambas enfermedades tienen como eje principal la alteración del metabolismo de lípidos, la respuesta inmune y la activación del ciclo celular. Las opciones terapéuticas actuales son escasas y muy limitadas por lo que es necesario encontrar nuevas dianas terapéuticas. La familia de factores de transcripción E2F está compuesta por proteínas reguladoras del ciclo celular. Sin embargo, los miembros de la familia E2F ejercen otras funciones; en concreto, E2F1 participa en procesos metabólicos y tanto E2F1 como E2F2 han sido relacionados con la regeneración hepática y la maduración de determinadas células del sistema inmune. Por lo tanto, en este trabajo se propuso investigar el papel y el valor potencial como dianas terapéuticas de E2F1 y E2F2 en el CHC relacionado con NAFLD y en la lesión hepática inducida por APAP.

En esta tesis, se han realizado análisis multimodales mezclando datos estructurales y funcionales del cerebro adquiridos con RM y datos transcriptómicos de alta resolución adquiridos a partir de muestras cerebrales de donates sin una patología aparente (normativos). Los análisis realizados han obtenido nueva información sobre la neurobiología subyacente en (i) la implicación de redes cerebrales que combinan la información de la estructura y la función cerebral en trastornos relacionados con el sistema nervioso central, (ii) los patrones de neurodegeneración de la Distrofia Miotónica Tipo I y (iii) las alteraciones de la conectividad funcional en un subgrupo de pacientes con Trastorno del Espectro Autista. Como resultado, se ha desarrollado una metodología que se puede aplicar para procesar datos cerebrales, basada en resonancia magnética, con el objetivo de analizar redes cerebrales estructurales y funcionales a macroescala, y relacionar esos datos cerebrales con datos transcriptómicos de genes de alta resolución.

Herrialde garatuetan bizi itxaropenaren igoera eta ugalkortasunaren zein hilkortasunaren jaitsiera, populazioa zahartzea eragiten ari da. Hortaz, 65 urte baino gehiagoko populazioa beste adin-tarteena baino azkarrago hazten ari da eta menpekotasun tasek gora egin dute azken urteetan. Zahartzearen aldaketa demografikoaren ondorioz, Munduko Osasun Erakundea zahartze osasuntsuan eta aktiboan oinarritzen da alor fisiko, psikologiko zein sozialean zahartze arrakastatsua eta funtzionala sustatzeko. Hau da, adineko pertsonetan eguneroko oinarrizko jarduerak burutzeko gaitasuna sustatu nahi da, nork bere burua zaintzeko eta modu independentean bizi ahal izateko. Komunitatean bizi diren adinekoekin alderatuta, instituzionalizatuta bizi diren pertsonen profila konplexuagoa da, besteak beste, adinduagoak, menpekoagoak, hauskorragoak eta sedentarioagoak direlako. Ariketa fisikoa zahartze arrakastatsua lortzeko baliabide egokia dela frogatu da, sedentarismoaren ondorio kaltegarriak ekidin eta gainbehera fisiko nahiz funtzionala saihesten baitu. Komunitatean bizi diren adineko pertsonetan ariketa fisikoko programek egoera fisikoa, psikologikoa eta kognitiboa hobetzeaz gain, hauskortasun eta menpekotasun egoerak murriztea lortu dute. Instituzionalizatuta bizi diren adineko pertsonetan ariketa fisikoko programek egoera fisikoan onurak sortzen dituzten ebidentzia badago ere, denborarekin egoera fisiko, funtzional zein kognitiboa endekatzen doa eta hauskortasun eta menpekotasunean itzulgarritasuna lortzea zaila izaten da. Funtzionaltasunean oinarritutako ariketa fisikoko protokolo eta emaitza heterogeneoak aurki daitezke egoitzetan bizi diren adinekoetan eta ariketa fisikoko programek duten eraginkortasuna frogatzen duten ebidentziak beharrezkoak dira. Helburuak: 1-Norbanakoan oinarritutako, intentsitate moderatuan buruturiko eta sei hilabeteko iraupeneko funtzionaltasunean oinarritutako ariketa fisikoko programa progresibo eta gainbegiratu baten eragina (Functional Ageing-On) egoitzetan bizi diren adineko pertsonen aldagai antropometrikoetan, egoera funtzionalean, egoera fisikoan, hauskortasun indizean eta prebalentzian, egoera neuropsikologikoan eta aldagai klinikoetan aztertzea. 2-Functional Ageing-On programaren fase bakoitzak, osagai anitzeko ariketa fisikoa lehenengo hiruhilekoan eta ariketa fisiko funtzionala bigarren hiruhilekoan, egoitzetan bizi diren adineko pertsonen egoera funtzionalean, egoera fisikoan eta hauskortasun indizean eta prebalentzian izan duen eragina aztertzea. 3-Functional Ageing-On programa eten eta 6 hilabeteetara, egoitzetan bizi diren pertsona nagusien aldagai antropometrikoetan, egoera funtzionalean, egoera fisikoan, hauskortasun indizean eta prebalentzian eta egoera neuropsikologikoan gertatu diren aldaketak aztertzea. Metodologia: Ikerketa hau talde bakarreko esku-hartze multizentrikoa izan da. Hirugarren adineko (70 eta 103 urte bitartekoak) 16 egoitzetako 199 pertsonek hartu zuten parte (99 emakume eta 100 gizon). Parte-hartzaile guztiek hurrengo irizpideak betetzen zituzten: ¿ 70 urte, ¿ 50 puntu Barthel eskalan, ¿ 20 puntu MEC-35 eskalan eta bakarrik edota laguntzarekin aulkitik altxa eta 10 metro ibiltzeko gai izatea. Partehartzaileek 6 hilabeteetan zehar funtzionaltasunean oinarritutako eta norbanakoari egokitutako ariketa fisikoko programa gainbegiratu eta progresibo bat burutu zuten intentsitate moderatuan (Functional Ageing-On). Lehenengo hiruhilekoan osagai anitzeko ariketa fisikoko programa burutu zuten, egoera fisikoa hobetzeko helburuarekin. Bigarren hiruhilekoan, ariketa fisiko funtzionaleko programa ezarri zen egoera funtzionala hobetzeko xedearekin. Aztertu ziren aldagaiak antropometria, egoera funtzionala, egoera fisikoa, hauskortasuna, egoera neuropsikologikoa eta aldagai klinikoak izan ziren. Proiektuak UPV/EHU Etika Batzordearen (M10/2018/171) eta Matia Fundazioako Etika Batzordearen oniritzia eskuratu zuen. Ikerketa proiektuaren protokoloa ¿Clinical Trials¿-en (NCT04221724) erregistratu zen. Emaitzak: 1-Functional Ageing-On programak, egoera funtzionalaren endekapenari aurre egin zion eta Barthel-en indizearen batezbestekoan hobetzeko joera aztertu zen. Beheko gorputz adarren indarra, oreka eta ibileraren abiadura modu adierazgarrian hobetzeaz gain, hauskortasuna murriztea lortu zuen hauskortasuneko Rockwood-en, Fried-en eta Tilburg-en eskaletan. Gainera, Rockwood-en hauskortasun eskalaren arabera, hauskortasunaren prebalentziaren jaitsiera behatu zen. Azkenik, ariketa fisikoko programak bizi kalitatea eta zoriontasuna hobetzeko gaitasuna frogatu zuen. 2-Lehenengo hiruhilekoan buruturiko osagai anitzeko ariketa fisikoko faseak adinarekin gertatzen den egoera funtzionalaren endekapenari aurre egiteko gaitasunik ez zuen izan eta Barthel-en indizean jaitsiera adierazgarria behatu zen. Bigarren hiruhilekoko ariketa fisiko funtzionaleko faseak, ordea, funtzionaltasuna mantentzea lortu zuen. Osagai anitzeko ariketa fisikoko faseak egoera fisikoan hobekuntza adierazgarriak lortu zituen oreka estatiko eta dinamikoan eta beheko gorputz adarren indarra eta potentzian. Fase funtzionalak soilik ibileraren abiaduran lortu zituen hobekuntzak. Bi faseak eraginkorrak izan ziren hauskortasunaren prebalentzia murrizteko, osagai anitzekoan Fried-en hauskortasun eskalaren arabera eta funtzionalean, Rockwood-en eskalaren arabera. 3-Functional Ageing-On programa eten eta sei hilabeteetara, hauskortasunaren prebalentzia igo zen Rockwood-en eskalaren arabera, eta bizi kalitatea eta egoera kognitiboaren gainbehera adierazgarria behatu zen. Ondorioak: Honekin guztiarekin, Functional Ageing-On programa, egoera funtzionalaren endekapenari aurre egiteko, hauskortasuna murrizteko eta egoera fisikoa, bizi kalitatea eta zoriontasuna hobetzeko tresna eraginkorra dela frogatu da ikerketa honen bidez. Hiruhileko bakoitzeko faseak onura desberdinak eragin ditu: osagai anitzeko fasea, egoera fisikoan eta alor fisikoarekin lotura estuagoa duen hauskortasun parametroetan eraginkorragoa izan da fase funtzionala baino, baina endekapen funtzionala ezin izan du ekidin. Aldiz, fase funtzionalak, egoera funtzionala mantentzea lortu du eta ikuspegi funtzionalagoa duen hauskortasun parametroetan hobekuntzak eragin ditu. Dena den, egoera fisikoan ez ditu horrenbesteko onurak lortu. Functional Ageing-On programa eten eta gero, oro har, aldagaien endekapena gertatzen dela ondorioztatzen da, modu adierazgarrian hauskortasun prebalentzia igoz eta bizi kalitatea zein egoera kognitiboa okerragotuz. Instituzionalizatuta bizi diren adineko pertsonetan ikerketa gehiago behar dira ariketa fisikoaren bitartez funtzionaltasunean eta funtzionaltasunari lotutako parametroetan gertatzen diren aldaketak gehiago aztertuz. Adinarekin gertatzen den endekapen funtzionala ekiditeko, ariketa fisikoko programak denboran mantendu beharko lirateke, ez behin behineko jarduera bezala, egoitzak eskaintzen duen behin betiko jarduera bezala baizik.

El colangiocarcinoma (CCA) es un conjunto de tumores que se originan en la vía biliar y debido a su carácter asintomático, se diagnostican en fases muy avanzadas, limitando sustancialmente las posibles opciones terapéuticas. Por ello, existe la urgente necesidad de descubrir los mecanismos moleculares involucrados en el desarrollo y progresión del CCA con el fin de encontrar nuevas dianas terapéuticas, así como biomarcadores para su diagnóstico precoz y para poder predecir su pronóstico. Durante los últimos años, se ha observado que el receptor scavenger MARCO tiene un papel clave en la polarización de los macrófagos y en consecuencia en la respuesta inmune adaptativa. Evidencias recientes en tumores sólidos como el carcinoma de mama, colon y melanoma indican que el receptor MARCO se expresa en macrófagos asociados a tumor (TAMs) tipo M2 inmunosupresores en el microambiente tumoral, contribuyendo a la inmunosupresión y al desarrollo y progresión de estos cánceres. Sin embargo, el papel de MARCO en la etiopatogenia del CCA permanece prácticamente desconocido. Nuestros datos en muestras de pacientes con CCA intrahepático (iCCA) indican que MARCO se encuentra en TAMs involucrados en procesos asociados a la inmunosupresión y a la remodelación de la matriz extracelular. Además, elevados niveles de expresión de MARCO en muestras de iCCA están asociados con un peor pronóstico y también se relacionan con una disfuncionalidad de los linfocitos T. En este sentido, los ratones deficientes de MARCO (Marco-/-) han demostrado tener una protección frente al desarrollo y progresión del iCCA en diferentes modelos experimentales murinos, y estudios proteómicos llevados a cabo con células de iCCA murinas y macrófagos residentes del hígado demuestran una regulación de procesos clave implicados en la colangiocarcinogénesis.

En los últimos años la práctica de la biomedicina se está viendo afectada por la aparición de nuevas tecnologías que inciden directamente en el enfoque de la actuación biosanitaria y las posibilidades de mejorar considerablemente las intervenciones enfocadas a la prevención y tratamiento de diversas patologias. Entre estas tecnologías destacan dos, que serán las que se estudiarán particularmente en este trabajo: la edición genética de seres humanos mediante la tecnología CRISPR-Cas y la irrupción de las tecnologías que hacen uso de los datos personales, como los nuevos mecanismos de inteligencia artificial o los dispositivos capaces de recoger datos que se transmiten a los profesionales sanitarios de manera automatizada. En esta tesis se analizan las principales cuestiones éticas y sociales que despiertan estas nuevas herramientas. Sus principales conclusiones vienen a ser las siguientes: la edición de la línea germinal humana todavía es demasiado insegura para su uso en la práctica clínica. No obstante, podría ya investigarse con embriones disponibles, siempre que no se implantaran en una mujer. De por sí, no es una práctica que desafíe a la dignidad humana. Por el contrario, una vez superados los obstáculos técnicos que muestra ahora mismo, su implementación puede ser considerada una exigencia del principio de beneficencia. De hecho, una de sus grandes virtudes es ampliar los beneficios que proporciona el diagnóstico genético preimplantatorio deshaciéndose a la vez de su vertiente eugenésica. Con respecto a la inteligencia artificial y, en general, al uso de mecanismos de decisión automatizada, la tesis pone el acento en la necesidad de dotar tanto a los profesionales sanitarios como a los pacientes de herramientas que en la práctica sirvan para evitar que se tomen decisiones sobre terceros sin su intervención directa. La implementación de figuras nuevas que sirvan de intermediadores, o la creación de un derecho a la objeción de conciencia relacionado con el uso de estos mecanismos resultan particularmente interesantes en este sentido.

El cáncer y la inflamación están estrechamente relacionadas de forma bidireccional, y la inflamación crónica está considerada como una característica intrínseca del cáncer. La Oncostatina M (OSM) es una citoquina inflamatoria pertenece a la familia de citoquinas de la interleukina 6, que participa en procesos como las respuestas inmunes, la regeneración y el metabolismo. Los datos presentados en esta tesis demuestran que OSM promueve la aparición, desarrollo y metástasis del cáncer de mama, sobre todo en los tumores con peor pronóstico que carecen del receptor de estrógeno. Asimismo, OSM promueve la aparición y el crecimiento del carcinoma hepatocelular, sobre todo cuando este se origina en un contexto inflamatorio. Se ha visto que los mecanismos subyacentes de dichos efectos incluyen una mayor capacidad migratoria, invasiva y metastásica de las células tumorales per se, una mayor activación de los fibroblastos y una gran remodelación de la matriz extracelular producido tanto por las células tumorales como por los fibroblastos, dando lugar a un aumento de fibrosis. Además, elevados niveles de OSM o su receptor OSMR se han visto asociados a una menor supervivencia en pacientes de cáncer de mama que carecen del receptor de estrógeno, así como de un subtipo de pacientes de carcinoma hepatocelular. Todos estos datos apoyan la vía de señalización de OSM como una prometedora diana terapéutica para ciertos pacientes de cáncer de mama y carcinoma hepatocelular.

Los objetivos de esta tesis fueron (1) describir la epidemiología de los equipos del Athletic Club, (2) analizar el crecimiento y maduración como factores de riesgo y (3) comparar los métodos para estimar el estado madurativo. Esta tesis estudió los datos recogidos en los jugadores del Athletic Club en las temporadas 1997-2022 (lesiones, antropometría y edad ósea). Los resultados demostraron que las lesiones de rodilla tienen un mayor impacto en los equipos femeninos. Además, las lesiones de crecimiento tuvieron un mayor impacto en las categorías cercanas al pico de crecimiento (PHV); es decir, entre U13-U16. En cuanto a los factores de riesgo relacionados con el crecimiento y maduración, los resultados demostraron que el estado madurativo (pre-, circa-, post-PHV, adulto), timing madurativo (precoz, normal, tardío) y velocidad de crecimiento y del PHV (rápido, normal, lento) afectan en el riesgo de lesión. En cuanto al estado madurativo, las lesiones de crecimiento tuvieron un mayor impacto en circa-PHV, mientras que las lesiones musculares y articulares/ligamentosas tuvieron un mayor impacto en post-PHV y especialmente, en adultos. En los jugadores con un timing tardío el riesgo de sufrir lesiones de crecimiento y articulares/ligamentosas en pre-PHV fue menor en comparación con los maduradores normales. Además, el riesgo de lesiones articulares/ligamentosas de rodilla fue mayor en los tardíos adultos que en los maduradores precoces. En cuanto a la velocidad de crecimiento y PHV, las lesiones de crecimiento tuvieron un mayor impacto en los jugadores con un crecimiento rápido. Finalmente, los resultados de esta tesis demostraron que la evaluación visual de curvas incompletas hecha por un evaluador con experiencia es el mejor método para clasificar los jugadores como pre-, circa- o post-PHV. ABSTRACT The main aims of this thesis were to (1) describe Athletic Club¿s teams¿ epidemiology, (2) study growth and maturation as injury risk factors and (3) compare methods to estimate maturity status. For this purpose, data recorded in Athletic Club in 1997-2022 seasons was analysed (injury, skeletal age, and anthropometrical data). Results showed that knee joint/ligament injuries had a higher impact in women¿s teams, while growth-related injuries had a higher impact in categories around peak height velocity (PHV) (U13-U16). Concerning growth- and maturity-related risk factors, results showed that maturity status (pre-, circa-, post-PHV, adults), maturity timing (early, on-time, late) and growth-velocity and PHV (quick, average, slow) affected injury risk. Regarding maturity status, the impact of growth-related injuries was higher in circa-PHV, while muscle and joint/ligament injuries had a higher impact in post-PHV and, specially, adults. Late maturers had a reduced risk for growth-related injuries in pre-PHV compared to on-time maturers. Further, adult late maturers had a higher risk for knee joint/ligament injuries compared to early maturing adults. Besides, players with quick growth velocity or PHV had a higher growth-related injury risk. Finally, our results showed that visual evaluation of incomplete growth curves by an expert assessor was the best method to classify players as pre-, circa- or post-PHV.

Tesi honetan alde batetik, egoitzetan bizi diren adineko pertsonetan Functional Ageing On programaren eraginkortasuna baldintzatzen duten faktoreak aztertu dira. Bestetik, arlo ezberdinetan erantzule edo ez erantzule direnean, arlo guztietan erantzule edo ez erantzule ote diren aztertu da. Honetarako, Gipuzkoako 16 egoitzetako 148 adineko pertsonen egoera funtzionala, egoera fisikoa, egoera kognitiboa eta egoera psikoafektiboa kontuan hartu dira. Azterlan honetan, laginaren ezaugarrien araberako banaketak (sexuka eta medianaren arabera) eta SPPBn, MoCan, bizi-kalitatean eta zoriontasunean ez-erantzule eta erantzuleen banaketa, Student-en ttest erlazionatuaren proba, bi noranzkoko (taldea eta denbora) neurri errepikatutako ANOVA eta taldeen arteko elkar eragitearen magnitudea partial ¿2 erabiliz kalkulatu da. Erantzule izateko zein faktoreek eragiten duten aztertzeko erregresio logistiko anizkoitzak egin dira. Nahiz eta adineko egoitzetan bizi diren adinekoen ezaugarrien arabera Functional Ageing On ariketa fisikoko interbentzioarekiko sentikortasuna ezberdina izan, aztertutako talde guztiek izan zituzten ariketa fisikoaren onurak. Adin baxuagoa, GMI baxuagoa eta TUG burutzeko denbora gutxiago behar izateak SPPBn erantzule izateko aukera gehiagorekin lotu zen. GMI altuagoa eta Tilburg-en araberako hauskortasun maila altuagoa MoCan erantzule izatearekin eta bizi-kalitatearen testean eta zoriontasunean puntuazio baxuagoa izatea, test horietan erantzule lotu ziren. SPPBn ez-erantzuleek, Rockwood-en hauskortasun eskalan eta zoriontasunean; MoCan ez-erantzuleek Fried-en fenotipoan eta SPPBn; bizikalitatearen testean ez-erantzuleek Rockwood-en eskalan eta SPPBn eta zoriontasunean ez-erantzuleenk Rockwood-en eta Tilburg-en hauskortasun irizpideetan eta ibilera abiadura eta SPPBn hobetu zuten. Beraz, edozein dela ere sexua, adina, menpekotasun edo hauskortasun maila, egoera fisiko edo neuropsikologikoa, adinekoen egoitzetan bizi diren adinekoak ariketa fisikoko interbentzioez baliatu daitezke. Gainera, aldagai batean ez-erantzule izan arren, beste aldagaietan onurak izan dezakete partehartzaileek.

Los factores de transcripción Kru¿ppel-like factor (KLF) regulan procesos de organogénesis, diferenciación y homeostasis celular, a través de su interacción con importantes vías de señalización. En algunos tipos de cáncer, la expresión y/o actividad de ciertos KLFs se encuentran alteradas, favoreciendo la progresión tumoral. En este estudio se investigó el papel de en el desarrollo y progresión del colangiocarcinoma (CCA), así como su potencial valor diagnóstico, pronóstico y como diana terapéutica. Para ello, se analizó la expresión de KLF15 en tejido de pacientes con CCA e hígado sano adyacente al tumor, así como en líneas celulares humanas de CCA en comparación a colangiocitos humanos normales (NHC), observando que el descenso en la expresión de KLF15 parece ser un evento general en CCA. Por otro lado, analizamos el perfil de metilación del gen KLF15 en tejido de pacientes de CCA, verificándose hipermetilación en regiones promotoras del gen que se correlaciona inversamente con la expresión de KLF15 e incubamos líneas celulares humanas de CCA con un agente hipometilante, recuperando parcialmente la expresión del factor de transcripción. Simultáneamente, generamos mediante transducción lentiviral líneas celulares de CCA con sobrexpresión de KLF15, que presentaron una menor capacidad proliferativa y agresividad in vitro y un crecimiento más lento en tumores subcutáneos in vivo. Además, realizamos un análisis proteómico para identificar aquellas proteínas diferencialmente expresadas en las líneas celulares de CCA con sobrexpresión de KLF15. En conclusión, el factor de transcripción KLF15 actúa como supresor tumoral en CCA, presentándose como un posible biomarcador diagnóstico y pronóstico, así como una importante diana terapéutica.

La osificación endocondral es el proceso mediante el cual se forman los huesos largos, donde algunos condrocitos hipertróficos se convierten en células óseas trabeculares. Los procesos moleculares implicados en esta transición de cartílago a hueso aún no han sido estudiados. En casos de pérdida ósea debido a traumatismos, enfermedades o defectos congénitos, la regeneración ósea se vuelve esencial. Los mecanismos endógenos de reparación a menudo son insuficientes, lo que hace necesario el uso de implantes óseos para facilitar el proceso de curación. Estos implantes actúan como andamios, y aunque son biocompatibles y resistentes, aún se puede mejorar la osteointegración y la osteodiferenciación. En esta tesis, se abordan aspectos relacionados con la formación y regeneración ósea, no solo con el objetivo de comprender mejor la transición de cartílago a hueso, sino también para desarrollar andamios biomiméticos tanto para estudiar la transición de cartílago a hueso, como para potenciar la formación ósea en implantes de titanio.

Biztanleriaren zahartzea dela eta, desgaitasuna duten pertsona nagusien zainketa profesionalen beharrak nabarmen hazten ari dira. Erronka honen aurrean, protagonista nagusiak zaintzaileak dira. Zaintzaileetan min lunbarraren prebalentzia altua da, eta honek kalte pertsonal eta ekonomikoak eragiten ditu langile, pertsona nagusi, enpresa eta gizartean. Hortaz, tesi honen helburu orokorra zaintzaileen min lunbarrari aurre egiteko ezagutza eta baliabideak sortzea da. Tesi honetako emaitzak lau artikuluren bitartez aurkezten dira, horietako bakoitza helburu espezifiko bati lotuta. Lehenengo artikuluan, 1,950 partaiderekin urte betez egindako jarraipen prospektibo baten bitartez, osasun mentala eta bizitasuna bizkarreko minaren iragarle direla frogatzen dugu. Bigarren artikuluan, funtzio muskularreko probak bideokonferentzia bitartez egitea bideragarria eta fidagarria dela frogatzen dugu, aurrerago zaintzaileetan bideokonferentzia bitartez egindako ariketa fisikoko esku-hartzea martxan jartzea baimendu ziguna. Hirugarren artikuluan esku-hartze horren eraginak aurkezten ditugu, proposatutako ariketa fisikoko programa zaintzaileen min lunbarra gutxitzeko eraginkorra izan zela frogatuz. Laugarren artikuluan ariketa fisikoko esku-hartzearen epe luzeko eraginak adierazten ditugu, ariketa fisiko gainbegiratua egiteari uztean min lunbarraren gaineko hobekuntzak desagertu zirela frogatuz. Behatutako emaitzetan oinarrituta, komenigarria dirudi zaintzaileei tesi honetan proposatzen den moduko ariketa fisikoko esku hartzeak era iraunkorrean eskaintzea.

La ingeniería tisular es un campo interdisciplinar que permite el desarrollo de sustitutos biológicos con fin terapéutico. Su firme objetivo es restaurar y regenerar los tejidos, redefiniendo la forma en la que se abordan las patologías. Para ello se basa en la combinación de las siguientes herramientas: 1) biomateriales, 2) células, 3) moléculas bioactivas y 4) tecnologías de fabricación. La efectividad de los tratamientos se basa en la capacidad para aplicar estas herramientas de manera estratégica y adaptativa a cada patología específica. La presente tesis doctoral explora estrategias que aplican este principio, centrándose en el desarrollo de tratamientos específicos basados en la ingeniería tisular para las perforaciones crónicas de la membrana timpánica y la incontinencia urinaria de esfuerzo. Por un lado, las perforaciones crónicas de la membrana timpánica son una afección frecuente, principalmente originada por traumatismos e infecciones del oído. Aunque en la mayoría de los casos las perforaciones tienden a cerrarse de manera espontánea gracias a la actividad de células madre latentes, la ubicación, tamaño y otros factores pueden dar lugar a la persistencia de la lesión. Actualmente, el enfoque terapéutico convencional implica intervenciones quirúrgicas de reconstrucción, las cuales son altamente invasivas, requieren habilidades quirúrgicas significativas y están asociadas a costos elevados; además, su efectividad no está garantizada en todos los casos. Por ende, en este estudio se ha explorado una alternativa terapéutica basada en el desarrollo de un sustituto biomimético conformado por una película acelular compuesta de materiales naturales. La precisa elección de sus componentes dotó al constructo de las características más apropiadas no solo para servir de soporte estructural, sino para apoyar el proceso regenerativo. En efecto, el sustituto exhibió potencial como tratamiento para las perforaciones crónicas en un modelo animal, logrando el cierre de las perforaciones en un plazo de 10 días de tratamiento y facilitando una restauración integral de la estructura histológica. Por otro lado, la incontinencia urinaria de esfuerzo es una afección con alta prevalencia basada en la disfunción del esfínter urinario debido a diversas razones, como el parto vaginal o el envejecimiento. Los tratamientos actuales van dirigidos contra los síntomas de la enfermedad y no restablecen la función esfinteriana de forma efectiva. Además, las complicaciones asociadas a algunos de los tratamientos están generando cada vez más preocupación en los pacientes y la convicción de que merecen mejores terapias. Esta patología es una diana ideal en terapia celular y medicina regenerativa; sin embargo, los ensayos clínicos de inyección de células han demostrado que las fuentes celulares no siempre son adecuadas para su finalidad. En este contexto, este trabajo tiene como objetivo generar un wrap celularizado como tratamiento para la incontinencia urinaria de esfuerzo. Para ello, basándose en la combinación de células precursoras que favorecen los procesos de regeneración, neuroregeneración y revascularización del músculo estriado, se han desarrollado biotintas derivadas de tejidos descelularizados y se han optimizado técnicas de fabricación centradas en la bioimpresión 3D. En primer lugar, en la búsqueda de las fuentes celulares, se demostró que el cultivo en suspensión de las células aisladas de músculos de ratón deriva en la formación de esferas con una composición celular heterogénea. Concretamente, se describió la presencia de una población CD56+, que se compone de subpoblaciones con diferentes niveles de potencialidad que permiten, de manera paralela, la diferenciación miogénica y la conservación de la plasticidad celular, lo que podría ser de gran utilidad para su aplicación clínica. En segundo lugar, la descelularización de los tejidos resultó en la obtención de biotintas que conservan parcialmente la complejidad composicional de los tejidos nativos. De esta manera se ha demostrado que, en el caso de la biotinta muscular, la composición específica de las tintas derivadas de los tejidos descelularizados proporcionan no solo soporte estructural para las células sino las señales correspondientes para modular el comportamiento celular, permitiendo tanto la conservación del potencial celular como la diferenciación miogénica.

La nedilación es una modificación postraduccional (PTM) donde la molécula NEDD8 se conjuga a diferentes proteínas, modificando la estabilidad, localización o actividad de éstas. Esta PTM está aumentada en las células cancerígenas, lo que ha generado interés en el uso de inhibidores de la nedilación en terapias antitumorales. Sin embargo, hay poco conocimiento sobre el efecto de inhibir esta PTM en el sistema inmune. Por ello, el objetivo de esta tesis es analizar el papel biológico de la nedilación en la actividad antitumoral de los linfocitos T CD8+. En este contexto, esta PTM es necesaria para la proliferación, diferenciación y capacidades metabólicas de los linfocitos T CD8+. De hecho, NEDD8 se conjuga a tres enzimas glucolíticas, lo que confirma su relevancia. Todo esto se traduce en que inhibir la nedilación en linfocitos T CD8+ reduce sus capacidades antitumorales. Por este motivo, la nedilación tiene un papel relevante en la inmunidad antitumoral, y es una PTM para tener en cuenta en el diseño de nuevas inmunoterapias contra el cáncer.

Se estudian síntomas neuroconductuales, así como el funcionamiento neuropsicológico y la conectividad funcional en pacientes infectados por el SARS CoV-2. Para ello se realizaron tres estudios. En el primero se comparó la presencia de los síntomas neuroconductuales antes de la infección, durante y después (al momento de realizar la encuesta), a través de una escala estandarizada, en una gran muestra internacional. Además, se examinaron los factores de riesgo para el desarrollo de dichos síntomas. En el segundo, se estudiaron las interrelaciones entre dichos síntomas como un sistema dinámico, a través de un análisis de redes psicométricas. En el último, se comparó longitudinalmente el funcionamiento cognitivo y la conectividad funcional de un grupo de pacientes ingresados en la Unidad de Cuidados Intensivos (UCI) por un fallo multiorgánico (FMO) debido a la COVID-19 con el de otro grupo de pacientes con FMO debido a otra causa y un grupo de controles sanos. Los resultados indican que la COVID-19 cursa con un amplio abanico de síntomas persistentes, que se relacionan entre sí. Esto parece estar influido por factores demográficos y clínicos. Predominan los problemas cognitivos, particularmente las dificultades atencionales y un procesamiento lento de la información, que parecen estar relacionadas con un patrón de hipoconectividad funcional entre la RND y la red de saliencia.

Persistent epithelial defects (PEDs), chronic corneal ulcers and Limbal Stem Cell Deficiency (LSCD) are ocular surface pathologies challenging to treat, with no successful therapies yet stablished. Thus, effective new treatments are needed to address the associated complications with the current therapies and support corneal tissue regeneration for the restoration of visual function. In this context, A biocompatible hydrogel was developed in this thesis to act as a filler for the damaged corneal stroma, functionalised with bioactive molecules to support biological tissue repair mechanisms and restore ocular health and visual properties in PEDs- or stromal ulcer-affected patients. Regarding LSCD cases, corneal substitutes that promote the oligopotent growth of limbal epithelial progenitor cells (LEPC) and resemble the native cornea in composition and anatomy could be a viable therapeutic alternative for transplantation. Thus, we have characterised primary cultures of LEPC and their relationships with other cells present in the sclerocorneal limbus, such as melanocytes. The relation in the expression markers has provided a new approach to optimise the culture conditions needed for future corneal constructs that will be generated to offer an alternative to the donor transplants currently used to treat LSCD.

Adinkeria adinagatiko diskriminazioa da. Hiru dimentsioz eta hauek osatzen duten elementuz osatutakoa, dimentsio kognitiboa (estereotipoak), dimentsio afektiboa (aurreiritziak) eta jokabide dimentsioa (diskriminazioa). Adinkeria unibertsitateko ikasleetan aztertutako ikerlanek agerian utzi dute gradu desberdinetako ikasleek adinekeria izan dezaketela. Hau kontutan izanda ikerlan honen muinak osasun zientzietako ikasleek adinkeria zuten ala ez aztertzea eta Geriatrian eta Gerontologian oinarritutako irakaskuntzak eta praktika klinikoak adinekoekiko estereotipo negatibo eta aurreiritzietan zuten eragina aztertzea zen. Ikerketa hau kohortezko azterketa bat da, EHUko Gizakiekin lotutako ikerketetarako Etika Batzordearen onespena jaso ondoren garatu zena. Lagina osasun zientzietako 693 ikaslek osatu zuten. Barne irizpide gisa UPV/EHUko osasun zientzietako ikasleak, Leioako kampusean izatea, Erizaintza eta Medikuntzako 2. Mailan eta Fisioterapian 3. Mailan egotea eta borondatez baimen informatua sinatuta izatea izan ziren. Ezaugarri soziodemografikoez gain estereotipo negatibo eta aurreiritzien presentzia, hauek aldagai desberdinekin zuten erlazioa eta esku hartzearen eragina aztertu ziren. Osasun zientzietako ikasleetan estereotipo negatiboen presentzia txikia zen, desberdintasunak aurkituz graduen artean. Aurreiritzien maila berriz, antzerako izan zen hiru graduetan. Irakaskuntzan eta praktika klinikoan oinarritutako esku- hartzea eraginkorra izan zen estereotipo negatibo eta aurreiritziak murrizteko.

Ebidentziaren arabera, errahabilitazio geriatrikoak, ospitalizazio akutua izan duten adinduetan onurak dituela erakutsi du. Hala ere, hobekuntzak aldagarriak izan daitezke pazientearen arabera. Beraz, ezinbestekoa da arrakasta baldintzatu dezaketen aldagaiak identifikatzea. Horien artean mina eta nutrizio egoera daude. Era berean, egonaldian zehar, pazienteek jasan dezaketen gertakariak (erorketak, ospitalizazioak¿) aurreikusten dituzten aldagaiak identifikatzea ezinbestekoa da, errehabilitazioa baldintzatu dezaketelako. Hori horrela, doktorego tesi honetan, errehabilitazio geriatrikoa burutzen zeuden adinduetan, ingresuko minak, minaren maneiuak parámetro ezberdinekin zuen lotura eta gertakariak aurreikusteko faktoreen analisia burutu da. Ondorio nagusienak, minaren intentsitateak, minaren maneiuak eta nutrizio egoerak, aldagai ezberdinakin zuen lotura antzeman dugu, eta erlazio hau desberdina izan da errehabilitazio ingresu arrazoiaren arabera. Era berean, gertakariak aurreikusteko aldagaiak, desberdinak izan dira ingresu arrazoiaren arabera. Hortaz, doktorego tesi honek, agerian uzten du, ingresu arrazoiaren arabera burutu beharreko estrategiak desberdinak izan beharko liratekeela, bai errehabilitazioaren eboluzioa hobetzeko edota gertakariak ekiditzeko.

Esta tesis se ha centrado en el desarrollo de biomateriales basados en matriz extracelular descelularizada (en inglés, dECM) de tejidos porcinos y humanos, para su uso como biotintas en la impresión 3D de modelos dinámicos de cáncer. Debido a la necesidad de modelos alternativos a los animales de experimentación, el desarrollo y la aplicación de alternativas in vitro ha experimentado un crecimiento exponencial. El campo de los modelos de cáncer es particularmente activo debido a la prevalencia y variabilidad de esta enfermedad. Esta tesis se centró principalmente en el melanoma y el cáncer de mama, debido a su creciente incidencia en cáncer metastásico, teniendo como objetivo principal el desarrollo y la validación de biotintas derivadas de dECM para la modelización de tumores sólidos tridimensionales. En concreto, dicha investigación se llevó a cabo mediante el desarrollo de biotintas basadas en tejidos descelularizados; incorporación de nanopartículas para marcar diferentes poblaciones celulares; impresión de modelos tridimensionales de diferentes tumores; y prueba de medicamentos anticancerígenos en los modelos 3D.

Bakardadea giza harremanen sarea hautemateko esperientzi subjektiboa da eta bizi zikloko edozein momentutan agertu daitekeen sentimendua izan arren, pertsona nagusiak zaurgarriagoak dira. Zahartzaroa bera, nagusiaren bizimoduan aldaketa anitz gertatzen den momentua da, sarritan norberaren zainketaz gain, bikotea edo gertuko beste petsona baten zaintza ardura hartzen den unea ere bada. Zaintzaile rolaren betebeharrak alegia, nagusien osasunean eragina izan dezaketela iradoki da. Honela, bakardadea sentitzeak eta zaintzaile informala izateak adineko pertsonen osasunaren dimentsioetan duten eragina aztertzea du helburu nagusitzat. Zeharkako diseinu deskribatzailea duen azterlan hau,EHUko Gizakiekin lotutako ikerketetarako Etika Batzordearen onespena jaso ondoren garatu zen eta lagina egoitzetan eta komunitatean bizi ziren 272 pertsonek osatu zuten.Barne irizpide gisa ¿60 izatea eta narriadura kognitibo, funtzional larria edota nahasmendu psikiatrikorik ez izatea izan zen. Ezaugarrri soziodemografikoez gain osasunaren dimentsio fisikoa, psikoemozionala eta hauskortasunaren balioespena egin zen balioztutako eskala bitartez. Bakardadeak eta zaintzak adinekoen osasunean eragin zuten, mendekotasuna antsietate eta depresio zeinuak zein hauskortasuna areagotuz, emakumeetan bereziki. Halaber, bakardadea eta zaintzaren bizipenari buruzko ikerketa gehiago behar da emakume eta gizonetan ondorio zehatz eta sakonagoak azaldu ahal izateko.

El colangiocarcinoma (CCA) es un cáncer biliar raro y heterogéneo, con una incidencia y mortalidad creciente. En este estudio planteamos la hipótesis de que el factor de transcripción KLF5 actúa como oncogén en el CCA, por lo que la inhibición de su expresión puede tener valor terapéutico. Por ello, nos planteamos estudiar el papel de KLF5 en la patogénesis y quimiorresistencia del CCA, así como testar el valor terapéutico de su inhibición genética (mediante tecnología CRISPR-Cas9) o farmacológica (compuesto ML264). Se ha concluido que la expresión génica de KLF5 es mayor en CCA humano que en el tejido hepático y biliar normal, independientemente del perfil mutacional del tumor. Hemos observado que los tumores con niveles más altos de KLF5 se asocian con mayor frecuencia a afectación ganglionar y a peor supervivencia tras cirugía. La ablación genética experimental de KLF5 en células de CCA (CCA KLF5-/-) redujo la capacidad de proliferación celular y demostró aumentar la muerte celular por apoptosis. Estas células CCA KLF5-/- fueron incapaces de generar tumores tras su inyección ortotópica en ratones inmunodeficientes y resultaron ser más sensibles a la apoptosis inducida por Gemcitaina-Cisplatino (GemCis). Además, la inhibición farmacológica de KLF5 con el compuesto ML264 disminuyó el crecimiento tumoral en modelos murinos de CCA y demostró potenciar el efecto citotóxico de GemCis tanto in vitro como in vivo. Por último, el análisis proteómico de las células CCA KLF5-/- mostró que la expresión de ocho proteínas implicadas en mecanismos de quimiorresistencia (MOC) está alterada en comparación con las células control, correlacionándose la expresión génica de 6 de estas proteínas con la expresión de KLF5 en tejido tumoral procedente de pacientes. En conjunto, nuestros datos indican que KLF5 actúa como oncogén en el CCA y que su inhibición farmacológica con ML264 podría representar una nueva estrategia terapéutica para el tratamiento de estos pacientes.

The human brain generates a large repertoire of spatio-temporal patterns, which support a wide variety of motor, cognitive, and behavioral functions. The most accepted hypothesis in modern neuroscience is that each of these representations is encoded in different brain networks. From MRI, networks can be defined anatomically (¿structural connectivity¿-SC) or functionally (¿functional connectivity¿-FC). Interestingly, while SC is by definition pairwise (white matter fibers project from one region to another), FC is not. In this thesis we have focused on the study of high-order interactions (HOI) that occur in functional networks, beyond the existing statistical relationships in pairs of regions. When evaluating the interacting n-plets, from triplets to order n, a novel type of statistical interdependencies appear, namely the synergistic and redundant interactions, which are inaccessible when evaluating interacting pairs. The study of these HOI in the human brain in aging and neurodegeneration is the purpose of this thesis.

El cáncer y la inflamación están estrechamente relacionados de forma bidireccional, y la inflamación crónica está considerada como una característica intrínseca del cáncer. La Oncostatina M (OSM) es una citoquina inflamatoria que pertenece a la familia de citoquinas de la interleuquina 6, que participa en procesos como la respuesta inflamatoria, la regeneración y el metabolismo. Los datos presentados en esta tesis demuestran que OSM promueve la remodelación del sistema inmune y la reprogramación del metabolismo en el cáncer de mama. Vemos que OSM, secretado por células mieloides, promueve la infiltración de macrófagos y neutrófilos, y que se asocia con factores disfuncionales para el efecto de las células T citotóxicas, que son las mayores efectoras de la función antitumoral. Hemos propuesto mecanismos que implican citoquinas o receptores de punto de control inmunitario como mediadores de dichos efectos de OSM. Por otro lado, observamos que OSM promueve la remodelación de la matríz extracelular en el tumor, y un metabolismo más glucolítico tanto en células tumorales como en fibroblastos asociados al tumor, efectos que además, vemos estrechamente ligados a los efectos relacionados a la remodelación de la infiltración inmune. Todos estos datos apoyan que la inhibición de vía de señalización de OSM podría suponer una prometedora diana terapéutica, en combinación con inmunoterapia, para pacientes de cáncer de mama

Colorectal cancer (CRC) is a major cause of cancer-related deaths due to its high potential for metastasis, particularly to the liver. The liver's direct blood supply from the colon makes it a frequent site for metastasis, worsening outcomes for patients. Understanding the molecular mechanisms of this process is critical for developing new therapies. One important factor in metastasis is epithelial-mesenchymal transition (EMT), which allows cancer cells to migrate. In the liver, liver sinusoidal endothelial cells (LSECs) interact with CRC cells, supporting tumor survival and growth. Recent research highlights the role of PCSK9, a protein involved in cholesterol metabolism, in promoting CRC metastasis to the liver. PCSK9 influences processes like EMT, cell proliferation, and immune evasion, and is found at elevated levels in CRC. This study explores how PCSK9 affects LSECs, facilitating liver metastasis. Findings show that PCSK9 is upregulated in LSECs in response to tumor signals, promoting cell adhesion, migration, and growth. Inhibiting PCSK9 reduced these processes and the size of liver metastases in a murine model, suggesting its potential as a therapeutic target for CRC liver metastasis.

Desarrollo de constructos de ingeniería tisular de origen marino para la regeneración de hueso alveolar, basados en materiales porosos 3D híbridos orgánicos-inorgánicos combinados con osteoesferoides. La síntesis del material híbrido emplea como componente orgánico matrices biológicamente activas de origen marino (quitosano y colágeno) y como elemento inorgánico, nanocristales de quitina (CHNC) mineralizados mediante un proceso de mineralización biomimético y actuando como agentes de nanorrelleno multifuncionales (nanoagentes de refuerzo, mejora de propiedades biológicas y conferencia de osteoinductividad a la matriz). Los osteosferoides se desarrollan a partir de esferoides de células madre mesenquimales humanas derivadas del tejido adiposo (hASCs) diferenciadas a linaje óseo.

Breast cancer is one of the most commonly diagnosed cancers worldwide and the most frequent neoplasm in women. Despite advances in available therapies, breast cancer treatment still faces critical challenges. Current research focuses on identifying novel therapeutic targets and investigating natural products with potential anticancer properties. Stilbenes have been widely documented for their diverse biological activities, including antifungal, anti-inflammatory and anticancer effects. Therefore, a 3D model was developed to better screen the biological activities of stilbenes. Stilbenes can undergo various chemical transformations. In this thesis, we studied the oligomerization of trans-resveratrol and trans-piceid and their isomerization under UV irradiation. Both chemical transformations led to new derived stilbenes. The biological properties of these compounds were investigated in breast cancer. The biological properties were first tested in cell culture in monolayers and the results were compared with those obtained in 3D models. Among the nine stilbenes tested, r2-viniferin was the most cytotoxic showing a strong anti-cancer activity in monolayers and 3D model. In contrast, the cytotoxic effect of r2-viniferin was not reported on the non-tumorigenic mammary epithelial cells. The results reported in this study, confirm the anticancer effect of r2-viniferin and its promising therapeutic potential against breast cancer.

Los avances en inmunoterapia del cáncer han revolucionado el tratamiento oncológico, subrayando el papel crucial del sistema inmunitario. Sin embargo, a pesar de la eficacia de los inhibidores de puntos de control inmunitario, la respuesta varía considerablemente debido a la complejidad del microambiente tumoral. Las células cancerosas alteran este microambiente para evadir la inmunidad, un proceso que incluye la modificación de los glicanos de la superficie celular, interfieriendo con la función de macrófagos y linfocitos T. En este contexto, Siglec-15, un receptor de ácidos siálicos en células mieloides, suprime la respuesta de linfocitos T, convirtiéndose en una diana potencial para nuevas terapias. Los estudios en modelos preclínicos de tumores sólidos muestran que su bloqueo mejora la actividad antitumoral. Además, este estudio detalla cómo Siglec-15 interactúa con CD11b en linfocitos T, y su potencial como objetivo para inmunoterapias, incluyendo terapias celulares basadas en células CART diseñadas para eliminar poblaciones mieloides inmunosupresoras. En resumen, los resultados sugieren que el desarrollo de terapias dirigidas contra Siglec-15 podría ofrecer nuevas opciones terapéuticas para pacientes con tumores sólidos avanzados.