ESPECÍFICAS:



El estudiante y la estudiante distingue y describe las bases de la separación cromatográfica y electroforética de proteínas y explica sus aplicaciones bioquímicas.



El estudiante y la estudiante ejecuta adecuadamente protocolos de laboratorio en Bioquímica y Biología Molecular, y los aplica especialmente a la purificación de proteínas, teniendo en cuenta criterios de pureza y rendimiento.



El estudiante y la estudiante maneja, interpreta y explica la información extraída de la literatura científica relativa a las técnicas de separación, purificación y caracterización proteica.



TRANSVERSALES:



El estudiante y la estudiante aplica en los trabajos académicos los resultados de un proceso de indagación y/o de investigación teniendo en cuenta Objetivos de Desarrollo Sostenible.



El estudiante y la estudiante sintetiza y comunica de forma oral y escrita las ideas, haciendo uso de un lenguaje académico e integrando los términos vistos en la asignatura.

1. Purificación de proteínas y ensayos enzimáticos.

2. Técnicas cromatográficas.

3. Técnicas electroforéticas.



Purificación de proteínas y ensayos enzimáticos.



Estrategias y etapas de la purificación de proteínas. Controles de la purificación. Criterios de pureza. Tablas de purificación. Técnicas de aislamiento y purificación de proteínas recombinantes.

Actividad enzimática con extractos enzimáticos y con enzimas purificados. Enzimas interferentes y auxiliares. Ensayos acoplados. Métodos continuos y discontinuos. Curvas de progreso de la reacción. Caracterización cinética de un enzima.



Técnicas cromatográficas.



Introducción. Definiciones. Historia de la cromatografía. Teoría de la cromatografía. Clasificación de las técnicas cromatográficas. Cromatografía de reparto y adsorción. La banda y el pico cromatográfico. El equilibrio cromatográfico. Propiedades de la campana Gaussiana. Parámetros cromatográficos: tiempo y volumen de retención, factores de retención, retraso y separación. Componentes de un sistema cromatográfico. Cromatografía de adsorción. Cromatografía sobre hidroxiapatito. Cromatografía de interacción hidrofóbica. Cromatografía de intercambio iónico. Cromatografía de afinidad. Cromatografía de reparto. Cromatografía de tamizado molecular. Cromatografía en papel y en capa delgada. HPLC, UPLC y FPLC. Cromatografía de gases. Cromatografía de fluidos supercríticos.



Técnicas electroforéticas.



Introducción. Teoría de la electroforesis. Clasificación. Electroforesis en geles. Electroforesis bidimensional. Electroforesis en otros soportes. Inmunoelectroforesis. Ensayo de actividad en geles. Electroforesis capilar.

Para seguir las explicaciones teóricas, el estudiantado dispone en el Aula virtual (e-Gela) de todas las diapositivas, lecturas complementarias, foro de participación sobre la materia trabajada en clase y demás materiales docentes. Además de las lecciones teóricas, los estudiantes realizan prácticas de laboratorio y de simulación con ordenador de la purificación de proteínas. Los estudiantes reciben información sobre recopilación de artículos científicos relacionados con la purificación proteica para la realización del trabajo de Seminario. Finalmente, los estudiantes presentan en público el trabajo realizado con los artículos que han trabajado previamente.

Sistema de evaluación



La docencia magistral será evaluada por una prueba final que comprende preguntas relativas a las clases magistrales, prácticas y seminarios, y que representa el 60-65% de la nota final. Al resto de actividades (seminarios, prácticas de laboratorio, resolución de ejercicios y de simulación con ordenador) se adjudicará el porcentaje restante (35-40%) hasta completar el 100%.

Se requiere aprobar la prueba final con una nota igual o superior a 5 sobre 10 para hacer media con el resto de apartados de la asignatura.

Se realizará una actividad conjunta con la asignatura Tecnología del DNA Recombinante / Biología Molecular e Ingeniería Genética con el objetivo de integrar el conocimiento adquirido en sobreexpresión y purificación de proteínas. Además, se trabajará la competencia transversal Compromiso Social y Comunicación y Plurilingüismo.

El estudiantado tendrá derecho a ser evaluado mediante evaluación final. Para ello, el estudiante o la estudiante deberá presentar por escrito al profesorado responsable de la asignatura la renuncia a la evaluación continua, para lo que dispondrá de un plazo de 9 semanas a contar desde el inicio del cuatrimestre.

En caso de renuncia a la evaluación continua, el estudiante será evaluado mediante una prueba final hecha en la misma fecha que la prueba final de la evaluación continua. Dicha prueba consistirá en el examen de la evaluación continua más otros exámenes y/o actividades equiparables a los trabajos evaluados en la evaluación continua.

La realización de las prácticas de laboratorio es obligatoria. No se podrá aprobar la asignatura si no se realizan las prácticas de laboratorio, con independencia del sistema de evaluación elegida (continua o final).

En cualquier tipo de evaluación, bastará con no presentarse a la prueba final para que la calificación de la asignatura sea no presentado o no presentada.



Ética académica y prácticas deshonestas

Esta asignatura se rige por el “Protocolo sobre ética académica y prevención de las prácticas deshonestas o fraudulentas en las pruebas de evaluación y en los trabajos académicos en la UPV/EHU”, con las consecuencias previstas en el apartado 5 de dicho protocolo.

No hay un único libro que pueda calificarse de libro de texto. Se dispone de una Aula virtual (e-Gela) abierta al inicio del curso en la que se incluyen materiales didácticos multimedia, lecturas complementarias y otras herramientas didácticas para seguir el curso. Para la simulación por ordenador se emplearán programas disponibles comercialmente.

Bibliografía básica

PRINCIPLES AND TECHNIQUES OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY. Keith Wilson and John Walker. 7th Ed. Cambridge Univ. Press, 2010



BIOCHEMICAL TECHNIQUES: THEORY AND PRACTICE, Robyt, J.F. and White, B.J. Waveland Press, Prospect Heights, 1990



BIOCHEMISTRY LABORATORY: MODERN THEORY AND TECHNIQUES. Rodney F. Boyer. Benjamin Cummings, 2006



FUNDAMENTAL LABORATORY APPROACHES FOR BIOCHEMISTRY AND BIOTECHNOLOGY, A. J. Ninfa and D. P.Ballou, Wiley, 1998



PRINCIPLES AND TECHNIQUES OF PRACTICAL BIOCHEMISTRY, B.L. Williams and K. Wilson, Cambridge, Cambridge University Press, 2005



THE TOOLS OF BIOCHEMISTRY, Cooper, T. Wiley and Sons, New York, 1977



ENZYME ASSAYS. A PRACTICAL APPROACH. Eisenthal, R. and Danson, M.J. (eds) IRL Press, Oxford, 1992

Bibliografía de profundización

BIOTECHNOLOGY. A LABORATORY COURSE, Becker, J.M., Caldwell, G.A. & Zacho, E.A. Academic Press, San Diego,1996

PROTEIN METHODS, Bollag, D.M. and Edelstein, S.J. Wiley-Liss, Inc., New York, 1991

GUIDE TO PROTEIN PURIFICATION, Deutscher, M.P. (Ed.) Methods Enzymology, vol 182, Academic Press, London,1990

PROTEIN PURIFICATION METHODS. A PRACTICAL APPROACH, Harris, E.L.V.& Angal, S. (Eds) IRL Press, Oxford,1989
PROTEIN PURIFICATION APPLICATIONS. A PRACTICAL APPROACH, Harris, E.L.V. IRL Press, Oxford, 1990
PROTEIN PURIFICATION PROTOCOLS, Doonan, S. (Ed.). Humana Press Inc., Totowa, NJ, 1996

ENZYME PURIFICATION AND RELATED TECHNIQUES, Jakoby, W.B. Academic Press, London, 1989

PROTEIN PURIFICATION: PRINCIPLES, HIGH RESOLUTION METHODS AND APPLICATIONS, Janson, J.C. and Rydén, L. (Eds) Wiley VCH Publishers, Inc., New York, 1998

PROTEIN PURIFICATION: PRINCIPLES AND PRACTICE, Scopes, R. Springer-Verlag, New York, 1998

A PRACTICAL GUIDE TO MEMBRANE PROTEIN PURIFICATION, von Jagow, G. and Schägger, H. (Eds.) Academic Press, New York, 1994

Revistas

Biochimica et Biophysica Acta, Journal of Biological Chemistry, Protein Expression and purification, Electrophoresis, Analytical Biochemistry, etc.